了解并掌握免疫组化实验中图象捕获及分析的原理、过程。（神经生物学实验讲义；杜继曾，陈学群主编；2004.09）

操作方法

Optimas6.5

原理

在以抗原抗体特异性结合为基础原理的免疫组化实验中，由于不同实验条件影响下抗原量的不同，会使不同动物同一区域组织片的染色图片呈现色彩深度上的差异。在图象分析中，这样的色彩深度差异即表现为单位面积灰度积分值的不同。图象分析的最终目的，即是根据染色深浅导致的灰度值大小不同，来半定量地比较对照组和实验组、各不同条件实验组的组织染色的差异。

材料与仪器

光学显微镜；PixeLINK 数字摄像头；电脑（操作系统windows；软件optimas）

步骤

1.  在染色片置于光学显微镜下，并用图象捕获软件捕获适当放大倍数下的图象。

2.  在 optimas 中打开图片。

3.  将图片转换成灰度模式。

4． 选定自己所染的目标区域，例如 pvn 区或海马区或 son 区。

5.  确定域值。

6.  指挥计算机根据域值选出符合条件的区域。

7.  将区域的面积、光密度积分值等数据传输到 excel 里。

8.  在 excel 里计算自己所需的目标区域的平均光密度值，并利用它含的统计功能求出统计数值，绘出统计图表

注意事项

在免疫组化结果分析中 Optimas 的几个关键工具当 optimas 被用于免疫组化结果图象的分析时，有几个关键的软件工具是必须重点提一提的。

1.  目标区域选择工具：用鼠标点击这几个工具后，在图上拖动，可以不同的形状选择自己感兴趣的区域，例如正方形，不定形，或椭圆形。

2.  域值调节工具：在灰度模式图象的色彩值中，0表示黑色，255表示白色。当我们调节域值时，电脑根据我们选定的值的范围，选择符合的图象区域，被选中的区域称为前景，呈现黄色，未被选中的，则是背景。调节域值，可见参照显示标准为域值线。点开域值调节面板后，可以通过拖动上下两个滚动条、鼠标移动，或者手工输入灰度值，来确定自己所需要计算区域的色彩域值。

3.  自动区域寻找工具：设定域值后，点击此工具，软件会根据域值在目标区内自动生成符合要求的小区域，以红线圈出。此区域也就是我们将从中收集数据的区域。

4.  数据收集设置：可在此面板中设定所需收集的数据类型，数据输出后的目标软件。

5.  宏记录工具：利用此工具，可以将自己需要反复进行的操作记录下来，以后执行每一次相同操作时，运行宏即可以。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com