冷冻切片机可以用于：（2）切制薄而均匀的组织片；（2）组织用坚硬的石蜡或其他物质支持，每切一次借切片厚度器自动向前（向刀的方向）推进所需距离，厚度器的梯度通常为1微米。

操作方法

显微冷冻切片

原理

切制石蜡包埋的组织时，由于与前一张切片的蜡边粘着，而制成多张切片的切片条。

材料与仪器

大小鼠大脑
手术器械 显微冷冻切片机 包埋剂
大小鼠立体图谱

步骤

1.  安装刀具，移上安全杆。调整切片机温度到-20 ℃(（右手边up 和down 二个按钮调节, up调高温度, down,降低温度）。

2.  从-80 ℃冰箱取出脑组织在切片机或-20 ℃冰箱中放1小时左右，目的为了平衡组织温度，太冷会在切片时出现脑片破裂的情况。

3.  用包埋剂（胶水代替）把组织固定在载物盘上（Blocker），注意一定要把脑放正。

4.  后退样品固定器（specimen holder），固定载物盘，并适当调节摇杆， 使的上下左右都正。

5.  打开安全杆，.前进载物盘，到适当位置（不要离的太近，以免不小心损坏刀，也不要离的太远）。

6.  调整刀距（切片厚度，section thickness and trim thickness），摇动把手（handwheel），开始切片（sectioning）。开始的时候可以选择大一点的刀距（trim thickness, 10-500um），到一定位置时使用调到需要的最后切片厚度(section thickness, 1-20 um)。

7.  到适当时候，贴几张脑片以确定上下左右是否正，并对照图谱找出大概位置。注意：贴片时手放在载玻片的两头，一端靠在切片机刀尾的位置轻轻往下压。

8.  对照图谱找到所要找到的核团并各留具有SON，PVN，海马（CA1，CA2，CA3）的典型脑片，并作上标记。

10.  清洁切片机，复原。

注意事项

切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。

常见问题

在切片过程中，视束有什么变化？并画出出现SON，PVN 和海马时视束的形状。

来源《神经生物学实验讲义》杜继曾、陈学群主编。

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