For-Met-Phe-OH:性质、应用及采购指南
For-Met-Phe-OH:性质、应用及采购指南
For-Met-Phe-OH是一种由甲酰基甲硫氨酸和苯丙氨酸组成的合成N-甲酰化二肽,可作为研究N-甲酰基肽受体(FPR)信号传导及先天免疫细胞趋化性的生化工具。
- 完整化学名称
- N-甲酰基-L-甲硫氨酰-L-苯丙氨酸
- 货号
- N1029684
- 肽类别
- N-甲酰基二肽
- 生物靶点
- N-甲酰基肽受体(FPR1/FPR2)
- 主要研究用途
- 趋化性测定、先天免疫信号传导研究
- 末端修饰
- N端甲酰基;C端游离酸(OH)
化学结构与命名
For-Met-Phe-OH,正式名称为N-甲酰基-L-甲硫氨酰-L-苯丙氨酸,是一种二肽,其中甲硫氨酸的α-氨基携带甲酰基(–CHO)保护基,C端以游离羧酸形式存在。其缩写遵循标准肽命名规则:For表示N端甲酰基帽,Met和Phe为氨基酸三字母代码,OH指定C端为未保护的游离酸而非酰胺。
这种结构基序模拟了原核生物和线粒体蛋白N端的N-甲酰基甲硫氨酸(fMet)翻译起始产物。由于哺乳动物细胞质核糖体不整合fMet,免疫系统将甲酰化肽作为病原体相关分子模式(PAMPs)和损伤相关分子模式(DAMPs)加以利用,使For-Met-Phe-OH成为相关的药理学探针。
作用机制:FPR受体结合
For-Met-Phe-OH主要通过N-甲酰基肽受体(FPR)发挥作用,该受体家族为G蛋白偶联受体(GPCRs),包括FPR1和FPR2。结合后,这些受体激活百日咳毒素敏感的Gi蛋白,引发下游事件,如磷脂酶C激活、胞内钙离子动员以及负责吞噬细胞呼吸爆发的NADPH氧化酶复合物激活。
For-Met-Phe这一二肽比经典三肽探针fMLF(N-甲酰基-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸)更短,因此可能表现出不同的受体选择性或效能特征。研究人员利用此类结构变体在FPR家族中绘制配体-受体构效关系(SAR),并解析各残基对受体激活的贡献。
FPR激活下游触发的关键细胞反应包括定向迁移(趋化性)、超氧阴离子产生、脱颗粒和细胞因子释放——这些均是中性粒细胞介导的先天免疫的核心过程。
研究应用
趋化性测定:For-Met-Phe-OH可作为趋化剂梯度,在Boyden小室或微流控迁移实验中招募中性粒细胞、单核细胞或表达FPR1/FPR2的转染细胞系,相对于fMLF提供更短的甲酰基肽对照。
受体药理学与构效关系研究:该化合物作为结构探针,用于研究FPR激活所需的最小肽长度,并为新型FPR配体提供基准。利用放射性标记或荧光标记fMLF类似物的竞争性结合实验可定量测定For-Met-Phe-OH的亲和力。
先天免疫与炎症模型:体外和离体中性粒细胞激活、活性氧(ROS)产生和脱颗粒研究可采用For-Met-Phe-OH刺激或启动吞噬细胞,有助于从机制上理解线粒体损伤触发的无菌炎症。
线粒体DAMP研究:由于线粒体保留了原核蛋白质合成机制,其释放的甲酰基肽可被FPR识别。For-Met-Phe-OH模拟此类线粒体信号,使其在组织损伤和无菌炎症模型中具有重要应用价值。
操作、储存与质量注意事项
溶解性:N-甲酰基二肽通常溶于极性有机溶剂,如二甲基亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)。母液通常以10–100 mM浓度溶于DMSO配制,使用前立即稀释至水性缓冲液中以减少水解。建议对每批次进行实际溶解性验证。
储存:与大多数合成肽一样,For-Met-Phe-OH应在–20°C或以下干燥避光保存,防止潮湿。避免反复冻融;首次使用时应对母液进行分装。
纯度与表征:阿拉丁科学试剂经过表征以确认其身份和纯度。建议研究人员索取批次特定的质量检验报告(CoA),其中包含HPLC纯度及质谱分子量确认数据。
安全性:按照标准实验室安全指南操作。作为肽试剂,For-Met-Phe-OH在常规条件下不属于高危险物质;但使用前请查阅安全数据表(SDS)并佩戴适当的个人防护装备。
常见问题
For-Met-Phe-OH与经典趋化剂fMLF有何区别?
fMLF(N-甲酰基-Met-Leu-Phe)是一种被广泛用作高效FPR1激动剂的三肽,而For-Met-Phe-OH是缺少中间亮氨酸残基的二肽。这种结构差异可能导致受体结合亲和力降低或FPR亚型选择性改变。因此,For-Met-Phe-OH可作为构效关系探针,用于理解肽链长度对FPR激活的贡献。
For-Met-Phe-OH最常用于哪些细胞类型?
For-Met-Phe-OH主要用于表达N-甲酰基肽受体的细胞,最典型的是人或小鼠中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞。它也被用于FPR转染的异源细胞系(如HEK293或CHO细胞),以便在排除内源性反应干扰的情况下单独研究受体药理学。
如何为细胞实验制备For-Met-Phe-OH工作溶液?
将For-Met-Phe-OH溶于无水DMSO配制高浓度母液(如10–50 mM),分装后储存于–20°C。每次实验时取一份分装液解冻,用温热的无血清实验缓冲液稀释至所需工作浓度,最终DMSO含量应低于0.1%以避免细胞毒性。建议在实验当天现配现用。
For-Met-Phe-OH是否适用于体内研究?
虽然包括更长类似物(如fMLF)在内的甲酰基肽已被用于炎症动物模型(如腹腔招募实验),但For-Met-Phe-OH特定用于体内研究的适用性取决于其稳定性、效能及实验模型。计划开展体内研究的研究人员应在其实验体系中验证该化合物的活性,并参考当前文献及机构指南确定给药剂量和给药途径。
参考文献
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