冻融法回收DNA片段可用于：

（1）获取纯化的DNA片段；（2）回收PCR产物。

操作方法

冻融法回收DNA片段

原理

冻融法是指采用反复冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。

材料与仪器

DNA胶条
Tris-HCl饱和酚 H2O 酚 氯仿 氯仿 无水乙醇 NaAc TE
离心管 离心机

步骤

1.  紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中；

2.  加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀；

3.  -20℃放置5-10min；

4.  4℃离心10000g×5min，上层液转移置另一离心管中；

5.  加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，振荡混匀；

6.  -20℃，放置5-10min；

7.  4℃离心10000g×5min，合并上清液；

8.  用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次，取上清；

9.  加入1/10体积3M NaAc（pH 5.2）、2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀；

10. -20℃，静置30min；

11. 4℃离心13000g×10min，弃上清，75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干；

12.  加适量H2O或TE溶解沉淀。

注意事项

DNA的胶条应全部融化再进行提取。

常见问题

现在多用试剂盒进行DNA回收。

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