巴氏染色的核心并非单一染料着色，而是通过核染、角化胞质染色和多色胞质复染形成细胞核、角化成分、成熟鳞状上皮胞质及非角化细胞胞质之间的层次差异。橘黄G6、EA36和EA50均属于胞质染色体系，但功能侧重点不同：橘黄G6主要突出角化相关结构，EA36和EA50则承担多色胞质分化与细胞类型区分。

关键词：巴氏染色；橘黄G6；Orange G-6；EA36；EA50；细胞学染色；角化细胞；胞质复染；鳞状上皮细胞；细胞病理学

1 巴氏染色体系中的分层染色逻辑

1.1 核染与胞质染色的分工

（1）核染层

        巴氏染色通常先以苏木素类染液完成细胞核染色，使核膜、染色质颗粒、核仁及核异型性获得清晰显示。核染质量直接影响细胞学诊断中核增大、核深染、核质比升高、染色质粗细不均等指标的判读。

（2）角化胞质染色层

        橘黄G6主要作用于角化或高度角化相关胞质成分。其功能不是普遍增强胞质着色，而是优先突出角化细胞、角化不良细胞及角蛋白丰富区域，使这些结构与非角化细胞形成清晰区别。

（3）多色胞质复染层

        EA36和EA50主要承担胞质复染与细胞类型分化功能。EA体系通过曙红、浅绿及调色组分之间的差异性结合，使成熟鳞状细胞、中层细胞、旁基底细胞、腺上皮细胞和部分反应性细胞呈现不同色调。

1.2 胞质染色的化学基础

（1）酸性染料竞争

        橘黄G、曙红Y、浅绿SF黄和俾斯麦棕等多为酸性染料或胞质染色组分，主要与胞质蛋白、角蛋白、黏蛋白及其他胞质结构发生不同程度结合。染料分子大小、扩散速度和组织亲和性差异，是巴氏染色呈现多色分化的基础。

（2）磷钨酸调节

        OG和EA体系中常含有磷钨酸等调节组分。磷钨酸可影响酸性染料之间的竞争性结合，使染色不只是简单叠加，而是形成具有选择性的胞质分化。其浓度和配方比例会影响橙黄、粉红和蓝绿色调之间的平衡。

（3）乙醇体系影响

        OG和EA类染液通常处于乙醇体系中。乙醇浓度影响细胞脱水状态、染料扩散和胞质透明度。水分带入、脱水不足或染液被稀释，均可能导致胞质发灰、层次变弱或背景混浊。

2 橘黄G6的功能定位

2.1 主要作用

（1）角化胞质显示

        橘黄G6主要用于显示角化胞质、角化不良细胞和角蛋白丰富结构。成熟角化鳞状细胞、角化碎片和部分角化性异常细胞在OG-6中可呈橙黄色、橙红色或橙棕色。

（2）角化状态提示

        OG-6的价值在于突出角化相关细胞，而不是普遍强化全部胞质染色。在宫颈细胞学及其他鳞状上皮细胞学样本中，橙黄色胞质通常提示角化程度较高或角蛋白含量较多，但病变判断仍需结合核形态和细胞排列。

（3）与EA复染衔接

        OG-6位于EA复染之前，具有预先标记角化结构的作用。理想情况下，OG-6形成的橙黄色信号应在后续EA染色后仍保持清晰，不应被EA复染完全覆盖。

2.2 典型染色表现

（1）角化细胞

        角化细胞胞质通常呈橙黄色至橙红色，胞质可较薄、透明或致密，细胞核可固缩、深染或消失。该表现有助于识别角化背景和角化性鳞状上皮成分。

（2）角化不良细胞

        角化不良细胞常表现为胞质致密橙染、细胞体积较小、核深染或核异型明显。OG-6可增强此类细胞的可见度，但其诊断意义仍需以核异型性、核质比和细胞成熟异常为依据。

（3）非角化细胞

        非角化中层细胞、旁基底细胞或腺上皮细胞不应被OG-6广泛强橙染。若非角化细胞大量橙染，应考虑染色时间过长、分化不足或后续EA复染平衡异常。

2.3 方法学特点

（1）选择性较强

        OG-6对角化相关成分具有较高选择性，是巴氏染色中区别角化与非角化胞质的重要环节。其染色质量直接影响角化性病变线索的识别。

（2）时间敏感性

        OG-6染色过短会导致角化细胞橙染不足，角化线索减弱；染色过长则可能导致背景泛黄或非角化细胞轻度橙染，降低胞质分化质量。

（3）复染覆盖风险

        EA体系复染过强时，OG-6橙黄色信号可能被绿色或灰绿色背景削弱。特别是在EA50体系中，应注意OG-6与EA复染之间的染色平衡。

3 EA36的功能定位

3.1 主要作用

（1）柔和型胞质复染

        EA36用于在OG-6之后进一步完成胞质多色复染，使不同成熟阶段的鳞状上皮细胞呈现粉红、浅绿、蓝绿或灰绿色差异。其色调相对柔和，强调细胞透明感和层次感。

（2）妇科细胞学适配性

        EA36常用于妇科细胞学染色体系，尤其适合宫颈脱落细胞中浅表细胞、中层细胞、旁基底细胞及炎性背景之间的分化观察。其染色风格更有利于保留传统巴氏染色的透明胞质效果。

（3）核胞质协调

        EA36复染强度应与苏木素核染和OG-6橙染保持协调。核染过浅、EA过强或OG信号不足，均会影响巴氏染色中核与胞质之间的诊断层次。

3.2 染色组分功能

（1）曙红Y

        曙红Y主要赋予成熟鳞状细胞胞质粉红至橘粉色调，尤其与浅表细胞和部分成熟细胞胞质有关。曙红作用偏强时，样本整体可偏粉红。

（2）浅绿SF黄

        浅绿SF黄主要使较未成熟细胞、代谢活跃细胞、腺上皮细胞和部分反应性细胞呈蓝绿色、灰绿色或淡绿色。该组分是EA体系区分非角化细胞和成熟鳞状细胞的重要基础。

（3）俾斯麦棕

        俾斯麦棕可调节EA染液综合色调和背景层次。不同配方中其比例并不完全一致，因此不同EA36产品可能在综合色调上存在差异。

3.3 典型染色表现

（1）浅表鳞状细胞

        浅表鳞状细胞胞质多呈淡粉红、橘粉或浅橙粉色，胞质透明度较高。细胞核通常较小、染色较深或固缩。

（2）中层鳞状细胞

        中层鳞状细胞胞质常呈蓝绿色、灰绿色或淡绿色，胞质边界清晰。该特征有助于判断鳞状上皮成熟层次。

（3）旁基底细胞与修复细胞

        旁基底细胞、修复细胞及部分炎症背景下的反应性细胞可呈较明显绿色或蓝绿色。若绿色过强、胞质过深，应考虑EA染色过度或分化不足。

4 EA50的功能定位

4.1 主要作用

（1）增强型胞质复染

        EA50同样属于EA系列胞质复染液，但通常表现出更强的胞质对比和更明显的绿色调。其功能重点是增强胞质识别度，使非角化细胞、腺样细胞和复杂背景中的细胞轮廓更清楚。

（2）非妇科细胞学适配性

        EA50常用于需要较强胞质对比的样本，例如浆膜腔积液、呼吸道样本、尿液、刷检样本和针吸细胞学样本。这类样本细胞来源复杂，背景蛋白、炎性成分和退变细胞较多，需要更强复染帮助识别细胞类型。

（3）与EA36的定位差异

        EA36更适合柔和、透明、层次细腻的妇科细胞学染色；EA50更适合提高复杂样本中的胞质对比和细胞边界显示。二者并非单纯强弱差异，而是适用于不同标本类型和判读需求。

4.2 典型染色表现

（1）非角化上皮细胞

        EA50可使非角化上皮细胞胞质呈较明显蓝绿、灰绿或绿色调，有利于观察胞质厚度、细胞边界和细胞群结构。

（2）腺上皮细胞

        腺上皮细胞胞质常呈蓝绿色、淡绿色或灰绿色。EA50在腺细胞来源样本中可增强细胞团边界、胞质质感和背景对比。

（3）复杂背景成分

        在积液、痰液或针吸样本中，EA50可增强细胞与背景之间的差异。但若染色过强，也可能使蛋白背景、黏液或炎性碎片着色增强，降低整体透明度。

4.3 方法学特点

（1）复染能力较强

        EA50对胞质复染能力较强，适合需要增强胞质对比的样本。但在宫颈细胞学中若控制不当，可能导致胞质绿色过重，破坏传统巴氏染色的柔和层次。

（2）分化条件敏感

        EA50染色后脱水、分化和透明步骤对最终色调影响较大。脱水不足可导致胞质发灰，分化过度则可能造成颜色偏淡。

（3）与OG-6平衡要求较高

        EA50复染较强时，更容易削弱OG-6橙黄色角化信号。因此使用EA50时，应注意OG-6染色时间、EA50染色时间和后续脱水步骤之间的平衡。

5 橘黄G6、EA36与EA50的功能区分

表1 橘黄G6、EA36与EA50的核心功能差异

5.1 功能层级差异

（1）橘黄G6负责角化识别

        橘黄G6的核心价值在于识别角化或角蛋白丰富结构。它是角化性鳞状上皮成分和角化不良细胞识别中的关键胞质染色环节。

（2）EA36负责柔和分化

        EA36主要用于妇科细胞学中不同成熟阶段鳞状细胞的胞质分层。其染色风格强调透明、柔和和层次稳定。

（3）EA50负责增强对比

        EA50更适用于细胞来源复杂或胞质边界需要强化显示的样本。其复染强度较高，有利于非妇科样本中的细胞类型识别。

5.2 颜色层次差异

（1）橙黄色层

        由OG-6主导，主要指向角化或角蛋白丰富结构。该层应清晰而不过度扩散，不应被EA复染完全覆盖。

（2）粉红色层

        主要由EA体系中的曙红成分贡献，常见于成熟鳞状细胞胞质。EA36中该层通常较柔和。

（3）绿色至蓝绿色层

        主要由浅绿SF黄贡献，常见于中层细胞、旁基底细胞、腺上皮细胞及部分反应性细胞。EA50通常使这一层次更突出。

6 不同样本中的选择策略

6.1 宫颈细胞学样本

（1）常规筛查

        宫颈细胞学强调核结构清晰、胞质透明、鳞状细胞成熟层次分明。OG-6与EA36组合较适合形成传统巴氏染色中橙黄、粉红和蓝绿之间的柔和层次。

（2）角化性病变观察

        若存在角化不良细胞、角化碎片或角化性鳞状上皮病变，OG-6染色质量尤为关键。此时应重点观察橙黄色胞质是否清晰、是否定位于角化细胞，而非背景泛黄。

（3）炎症背景样本

        炎症背景较重时，EA36若染色过强，可能导致炎性细胞、黏液或背景碎片着色增加。应通过染色时间和脱水步骤控制背景清晰度。

6.2 非妇科细胞学样本

（1）浆膜腔积液

        积液样本中常含间皮细胞、炎性细胞、退变细胞和肿瘤细胞。EA50较强的胞质复染能力有助于观察细胞群结构和胞质边界，但需避免背景蛋白过度着色。

（2）呼吸道样本

        痰液、刷检或灌洗样本常含黏液、炎性细胞、鳞状上皮细胞和腺样细胞。OG-6可显示角化或鳞化生成分，EA50可增强非角化细胞和腺样细胞的胞质识别。

（3）尿液与针吸细胞学

        尿液和针吸样本中细胞量、退变程度和背景成分差异较大。EA50可提高胞质对比，但若染色过深，可能影响核周结构和胞质细节观察。

表2 不同样本中OG-6、EA36与EA50的适配方向

7 常见染色偏差与原因分析

7.1 OG-6相关偏差

（1）角化细胞橙染不足

        常见原因包括OG-6染色时间不足、染液老化、脱水条件不佳或EA复染过强。结果表现为角化细胞与非角化细胞色调差异减弱，角化线索不突出。

（2）背景泛黄

        OG-6染色过长、分化不足或步骤间带液过多，可导致背景泛黄。背景泛黄会降低细胞透明度，并干扰角化细胞识别。

（3）非角化细胞异常橙染

        若中层细胞、腺细胞或背景细胞广泛橙染，应考虑OG-6选择性下降、染色时间过长或细胞固定脱水状态异常。

7.2 EA36相关偏差

（1）胞质过淡

        EA36染色时间不足、染液有效染料浓度下降或脱水过度，均可导致胞质颜色偏淡，细胞成熟层次不明显。

（2）绿色调不足

        浅绿成分作用不足时，中层细胞和旁基底细胞可能缺乏蓝绿色层次，整体偏粉红。该情况不利于区分不同成熟阶段的鳞状细胞。

（3）整体偏灰

        水分带入EA染液、脱水不彻底或透明步骤异常，可导致胞质色调发灰，细胞透明感下降。

7.3 EA50相关偏差

（1）绿色过强

        EA50染色时间过长或分化不足，可导致胞质绿色过强，细胞层次变硬，甚至掩盖细胞内细节。

（2）背景着色增强

        非妇科样本中蛋白、黏液和细胞碎片较多，EA50可能使背景成分着色增强。若背景过深，应调整染色时间和脱水条件。

（3）OG-6信号被削弱

        EA50复染过强时，角化细胞橙黄色可能被绿色或灰绿色视觉背景削弱。此时应重新平衡OG-6和EA50的染色时间。

表3 常见染色偏差及调整方向

8 巴氏染色相关试剂选型

表4 巴氏染色体系基础试剂

表5 巴氏染色成品染液与配套产品选型

        橘黄G6、EA36和EA50在巴氏染色中承担不同层级的胞质分化任务。OG-6突出角化结构，EA36提供柔和的妇科细胞学胞质分层，EA50增强复杂样本中的胞质对比。三者与核染、脱水和透明步骤共同决定巴氏染色的诊断可读性。

更多相关文章，详见下方：

[1] 巴氏染色