用于化学耦合、药物递送、纳米粒子功能化修饰、化学生物学以及生物标记等，其强大的功能性引起了人们强烈的研究兴趣，接下来将为大家一一展示9种常见的聚乙二醇修饰剂的一般共轭反应。

PEG-SPDP交联剂

简介

PEG-SPDP交联剂可通过胺-对-胺或胺-对-巯基交联反应实现蛋白质共轭，聚乙二醇（PEG）分子链中的间隔和间隙对于其在反应介质中的增溶起到了很大的作用。PEG-SPDP交联剂可溶解于有机溶剂中以制成储备溶液，能够在添加到反应混合物之前产生二硫键。SPDP试剂中胺反应部分是类似N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯反应的机理，通常是在pH=7-8的磷酸盐、碳酸盐/碳酸氢盐或硼酸缓冲液中进行的。

SPDP试剂的巯基反应部分是2-吡啶二硫基的结构，它在pH值为7-8、不含硫醇的缓冲液中反应效率最高。通过测定反应溶液在343 nm处的吸光度，可以确定吡啶-2-硫代置换的反应程度和进展，由此产生的交联产物中同时还会包含有一个二硫化物，可以用二硫苏糖醇（DTT）或THPP、TCEP进行还原拆分。在大多数情况下，使用SPDP试剂的交联反应可以在pH值为4.5的情况下用25 mM的DTT进行拆分，而无需减少天然蛋白质的二硫键。同时，用SPDP试剂进行交联的实验并不局限于涉及蛋白质类，其他任何含有伯胺和巯基的分子都可以用SPDP试剂进行修饰或交联。

产品处理和存储信息

1）收货后储存在-20°C，并防止受潮；

2）产品在室温下一般会装在放有干燥剂的密封袋中运输；此外，瓶子外会有塑料薄膜包裹，以保护产品不受潮并保持密闭性。

蛋白A-蛋白B通过PEG-SPDP耦合的过程

1）将5 mg PEG-SPDP溶于640 µL DMSO或DMF中，得到25 mM储备溶液；

2）将含胺蛋白A以1-5 mg/mL的浓度溶解在100mM的磷酸钠缓冲液（pH=7.2-8.0，1 mM EDTA）中；

3）将20 μL 25 mM的PEG-SPDP溶液加入到1 mL以上蛋白A溶液中；

4）室温下反应30-60分钟；

5）通过凝胶过滤法来将未反应的SPDP交联剂从含蛋白溶液中除去；

6）将含硫醇蛋白B溶解在100mM的磷酸钠缓冲液（pH=7.2-8.0，1 mM EDTA）中；

7）在脱盐的活性蛋白A中加入0.2-1.0摩尔当量的硫醇蛋白B溶液；

8）室温下反应8-16小时；

9）如有需要，产物可以进行进一步的纯化。

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