在葡萄糖－6－磷酸（GbB）和NADP存在下，葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）能使用NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下不会发出荧光。本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

葡萄糖－6－磷酸脱氢酶荧光斑点试验

原理

在葡萄糖－6－磷酸（GbB）和NADP存在下，葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）能使用NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下不会发出荧光。

材料与仪器

G6P NADP HCl
氧化型谷胱甘肽 皂素 蒸馏水

步骤

一、 实验试剂：混合试剂的成人与配方：

0.1mol/L    G6P     1ml

7.5mmol/L     NADP  1ml   0.7mol/L    tris－HCl（PH7.8）3ml

8mmol/L       氧化型谷胱甘肽　1ml

10g/L皂素2ml

蒸馏水2ml

如混合试剂分装后－20℃保存，可稳定数月

二、实验操作：

1. 标本采集：EDTA·Na2H或肝素抗凝全血，若置4℃保存可稳定1周，亦可用肝素化毛细血管从手指或足踉采末梢血液。

2. 取12MM×75MM试管3支，患者．正常（对照）和阳性（对照），血各管加入追合试剂200微升．

3. 向各管分别加入患者正常和阳性的抗凝全血20微升，混合后置25℃室温中。

4. 在反应0／min（混匀后立即吸出）5min和10min时分别从各管吸出反应液1滴，加于新华1号液纸上，使充分干燥．

5. 在暗室内，用波长200-340nm的紫外线照射滤纸上的斑点，检查有无荧光．

6. 正常人的0min斑点无荧光，5min和10min斑点出现荧光，10min斑点荧光最强，G6PD缺陷患者在0min. 5min和10min均无荧光。

三、 实验结果：正常人有甚强的荧光，G6PD缺陷患者荧光很弱或无荧光，杂合于或某些G6PD变异体者则可能有轻度到中度荧光．

注意事项

1. 本法是直接测定；NADPH的量特异性较好．2. 每次或每批要有G6PD正常和缺陷者的标本作对照．

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