确定Neu5Ac与Neu5Gc比率的广泛使用方法如下

通过温和的酸水解从糖蛋白中释放唾液酸残基。

用1,2-二氨基-4,5-甲苯氧基苯（DMB）荧光标记释放的唾液酸。

通过HPLC或UHPLC对DMB标记的唾液酸进行相对定量分析。

已经开发并验证了这种技术。 DMB试剂盒（目录号D491322）提供了从糖蛋白中释放唾液酸并用DMB标记它们所需的一切。该试剂盒包含最多22个糖蛋白样品的试剂和材料（每个样品50-100µg糖蛋白）。每个标记应使用约10pmol至2.5nmol的唾液酸。

试剂盒中包括唾液酸参考面板（包含Neu5Ac、Neu5Gc、Neu5,7Ac2、Neu 5、Gc9Ac、neu 5,9Ac2和Neu 5,7、（8）、9Ac3Gc）以及NeuAc和NeuGc定量标准。这三种标准品可以与释放的唾液酸样品一起用DMB标记。制备Neu5Ac和Neu5Gc定量标准品的系列稀释液可通过参考标准曲线进行定量分析。关于如何做到这一点的信息进行了解释™ DMB套件指南。如果需要，Neu5Ac和Neu5Gc定量标准也可单独购买，因为如果您正在为样品设置三份标准曲线，则可以获得额外的量。

对于阳性对照，我们建议使用胎球蛋白糖蛋白，它同时含有Neu5Ac和Neu5Gc唾液酸。我们还推荐一种纯化的唾液酸化糖肽标准品，这是系列中的第一种™ 定量标准，作为阳性对照。本标准是终止于两个N-乙酰神经氨酸的复合双十位N-连接聚糖。使用本标准将使您能够检查聚糖释放、标记和回收的效率，并使您对唾液酸测量的准确性有信心。还有出售一种标准品，可用于鉴定人促红细胞生成素（EPO）中存在的Neu5,9Ac2。制剂缓冲液可用作阴性对照。

在LS-uR2 UHPLC柱上对DMB标记的唾液酸参考面板进行分析。该参考面板可在样品运行前用作系统适用性标准，以检查聚糖的分离。

参考

Nguyen DH、Tangvoranuntakul P和Varki A.（2005）天然人抗体对代谢结合到活化和恶性免疫细胞中的非人唾液酸的影响。免疫杂志175:228-236。

阿拉丁：https://www.aladdin-e.com