将药物与脂质在有机溶剂中共溶，彻底去除溶剂后制备脂质体并定径，随后纯化以去除游离/晶态药物。

典型起始筛选条件：药物用量为总脂质的1–5 mol%；在高于体系中最高脂质Tm至少10℃的温度下水化；胆固醇20–45 mol%（在稳定性与装载量之间权衡优化）；最后通过SEC（体积排阻色谱）/TFF（切向流过滤）/透析去除游离药物与残余溶剂。

n常用方法

• 薄膜水化：脂质 + 药物溶于CHCl₃:MeOH（2:1，v/v）→旋蒸至干 → 在高于Tm的温度下置于高真空 ≥1–2 h → 高于Tm水化（可选5–10次冻融循环）→挤出（如100nm，≥10次通过）→ 纯化。
• 乙醇注射/微流控：将脂质 + 药物溶于乙醇（或异丙醇，IPA），并在高于Tm的条件下与缓冲液混合；在混合点乙醇体积分数通常约~20–40%（v/v）；随即稀释，并通过TFF/透析将乙醇降至≤1%（v/v）；纯化。
• 被动孵育（助溶剂辅助）：将乙醇或DMSO中的药物储备液加入预成型且处于高于Tm的脂质体；将最终助溶剂浓度控制在≤2–5%（v/v）；孵育15–60 min；通过SEC/透析/TFF去除溶剂/游离药物。

n关键检查

• 粒径/PDI（DLS）：分别在定径后与纯化后检测（目标PDI≤0.15–0.2）。
• 药物/脂质摩尔比：破裂脂质体（如用MeOH/IPA或ACN），以HPLC/UV或LC-MS定量药物，并以无机磷测定或HPLC-ELSD测定脂质；报告药物/脂质（mol/mol）及总体回收率。
• ​​​游离药物/晶体：进行目视/显微镜检查；并通过SEC色谱图谱（峰形）或过滤验证去除情况。
• ζ电位：可选，但有助于批次一致性。
• 残留溶剂：按适用法规限度确认已充分去除（例如采用GC）。
• 稳定性：2–8°C、避光保存；建议评估37℃血清中释放。

n常见问题与对策

• 形成过程中出现沉淀：降低药物摩尔百分比；升高温度（≥Tm + 10 °C）；延长孵育；水化时加入≤2% 乙醇（随后去除）；确认薄膜已完全干燥。
• 保留性差/释放过快：提高胆固醇比例（在20–45 mol%范围内）；更换为更高Tm的脂质（例如DSPC相对DOPC）；降低药物mol%；开展血清释放评估。
• 批次差异：标准化真空时间（≥1–2h）、水化温度、冻融次数、挤出孔径与通过次数，以及（针对微流控）FRR/TFR参数。
• PDI偏高/聚集：加入1–5 mol% PEG-脂质；确保适中离子强度（10–50 mM缓冲液）；重新挤出；避免长时间室温停留。

n备注

• 离子梯度驱动的远程装载主要适用于两亲性弱碱；对严格疏水性药物通常帮助有限。
• 部分疏水化合物会吸附于塑料表面——条件允许时优先使用玻璃器皿与低吸附枪头。
• 胆固醇可提升稳定性，但在高比例下可能降低装载量——需依据实验结果进行权衡。

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