在分子生物学研究与临床诊断领域，血浆游离RNA（cfRNA）作为一种极具价值的循环生物标志物，正受到日益广泛的关注。然而，由于其含量极微、极易降解，且存在于成分复杂的血浆样本中，如何高效、高质地提取cfRNA便成为了后续所有分析成功与否的基石。

一、什么是外周血，什么是全血，什么是血清，什么是血浆？

v外周血（peripheral blood）：指在体表血管（动/静脉、毛细血管）中循环、可通过常规采血获得的血液，相对“骨髓血、脐带血”等而言。

v全血（whole blood）：未经分离的完整血液=血浆（液体部分）+血细胞（红细胞、白细胞、血小板）。

v血清（serum）：血液凝固后挤出并离心得到的上清液；不含纤维蛋白原和大部分凝血因子。

v血浆（plasma）：采血时加抗凝，离心后得到的上清液；保留纤维蛋白原和凝血因子。

二、血浆游离RNA含量过少，选择何种方法提取？

血浆cfRNA含量极低、片段短且易降解，常用路线主要有三类：①酚-氯仿/TRIzol-LS类有机法；②硅胶磁珠法；③硅胶离心柱法。三者均可获得合格cfRNA，但适配场景与权衡不同：

①酚-氯仿法（含TRIzol-LS）

v适用：预算敏感或需同批回收RNA+蛋白/代谢物的研究型场景。

v要点：推荐加入载体（糖原或线性丙烯酰胺）与相分离助剂（如Phase-Lock Gel），严格控时控温、全程RNase-free。

v局限：有机溶剂操作与批间可变性较大；残留酚/盐会抑制RT-qPCR/文库建库，需充分洗涤或后续纯化。

②硅胶磁珠法

v适用：中—大体积血浆（通常0.5–4 mL及以上）、高通量与自动化平台；便于并联处理与上/下游集成。

v要点：可按体积线性放大；对超短片段（如miRNA）保留度取决于配方与结合盐度，选型需关注对小片段的验证数据。

v局限：不同品牌在回收率/抑制物携带方面差异明显；需校正洗脱体积与洗涤强度以兼顾产量与纯度。

③硅胶离心柱法

v适用：常规体积（单柱装载多为200–600 µL/次，可多次上样或合并多柱洗脱），手工流程、下游RT-qPCR/测序常规应用。

v要点：流程简洁、重现性好；可选miRNA专用或总RNA方案。

v局限：装载体积有限；如需处理≥1 mL血浆，通常需分次装载或前置富集。

三、血浆游离RNA试剂盒的选择标准？

(1)提取得率要高

血浆游离RNA实验中，试剂/试剂盒选型直接决定提取得率。选择不当常导致RNA浓度不足，进而无法开展后续基因克隆、基因/病原核酸检测、测序及分子杂交等分析。优选高回收率、低抑制组分的产品可显著提升起始RNA量与方法灵敏度，从源头提高整体实验成功率。

(2)提取的RNA纯度要高

核酸纯度常用A260/A280判定，即样品在260 nm与280 nm吸光度之比。纯RNA的A260/A280约为2.0（可接受范围通常1.9–2.1）。

v蛋白或酚污染会使A260/A280下降（<2.0）。

vDNA污染亦会使该比值向~1.8靠拢（相对RNA为下降）。

v同时关注A260/A230：理想应>2.0；若显著偏低，多为盐、糖或有机溶剂残留。

实操要点

v选用低抑制组分的试剂/柱，按说明充分洗涤并延长干燥步骤以去除有机残留。

v必要时加入DNase消化，降低基因组DNA干扰。

v全流程防RNase：无RNA酶耗材、戴手套、快速操作与低温保存。

v纯度合格后再进行定量与下游（qPCR、测序、杂交等），可显著提升数据可靠性。

四、阿拉丁的典型产品

Ø游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂（货号R665870）本品灵活处理不同起始量的样品，在有效裂解样本的同时，可有效保存RNA的完整性，提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，提取的RNA可用于RT-PCR、Northern Blot和分子克隆等下游实验。

五、常见问答

Q1：血浆样本应如何保存以避免cfRNA降解？

A：血浆游离RNA极易被RNase降解。采血后应立即离心分离血浆，并在2小时内完成RNA提取；若无法即时处理，应将血浆分装后置于−80℃保存，避免反复冻融。建议使用EDTA抗凝管，避免肝素干扰后续酶反应。

Q2：血浆游离RNA的提取体积对结果影响大吗？

A：影响显著。由于cfRNA含量极低，通常需使用≥200 µL的血浆体积以获得足够RNA量。若样本稀少，可通过多次提取并合并RNA溶液的方式提高总体回收量。

Q3：提取后的RNA浓度过低，如何改善？

A：

v提高起始样本量：在保证试剂比例的前提下，适当增加血浆体积。

v优化洗脱体积：可减少最终洗脱体积（例如从50 µL降至30 µL）以提高浓度。

v延长裂解时间或加强混匀：有助于充分释放cfRNA。

v确保试剂新鲜、避免吸附损失：使用低吸附离心管保存RNA。

Q4：为什么提取的RNA纯度（A260/A230）偏低？

A：主要因洗脱液中残留盐、醇或有机物。可通过增加洗涤次数或延长离心干燥时间解决。若偏低明显，说明清洗不彻底或干燥不足，应检查洗涤液体积与离心参数。

Q5：提取的RNA可直接用于下游测序或qPCR吗？

A：可以，但建议在上样前进行纯度与完整性检测。若存在DNA污染，需经DNase I处理。高纯度、高完整性的RNA样本可确保qPCR循环阈值（Ct）稳定、测序数据质量高。

综上所述，成功进行血浆游离RNA研究始于对样本本质的清晰认知，成于对提取方法与试剂的审慎选择。面对cfRNA含量稀少的核心挑战，采用高回收率、高纯度的离心柱法是目前经过实践验证的可靠策略。通过严格考量试剂盒的得率、纯度以及操作便捷性，研究者能够有效突破技术瓶颈，为下游精准的基因表达分析、病原体检测及高通量测序奠定坚实基础。

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