产品概述与预期用途

Human Th17染色试剂盒（2-8℃组分），货号H1521238WT，专为通过流式细胞术鉴定和表征人Th17细胞而配制。Th17细胞是CD4⁺辅助性T淋巴细胞的一个亚群，以分泌白细胞介素-17（IL-17）为特征，在黏膜免疫、自身免疫及炎症性疾病中发挥重要作用。准确染色该细胞群需同时进行表面标志物标记和胞内细胞因子检测，两个步骤须精心协调，以保护抗原完整性和细胞形态。

本试剂盒所有组分均针对2–8℃储存条件进行了优化，便于冷链管理。本产品仅供科研使用（RUO），不适用于诊断或治疗目的。

储存、操作与稳定性

本试剂盒所有组分须在2–8℃条件下储存，除产品说明书另有明确说明外，不得冷冻。冷冻可能导致抗体偶联物变性，并破坏固定液或破膜液的完整性，从而影响染色结果的可靠性。

关键操作建议：

• 避免荧光素偶联抗体长时间暴露于光线下。
• 使用前，除方案另有规定外，将试剂在室温下平衡10–15分钟。
• 避免反复冻融；若需在标注有效期之外长期储存，请咨询Aladdin Scientific技术支持。
• 请勿使用超过标注有效期的组分。

本批次的具体稳定性数据请参阅Aladdin Scientific提供的质量检验报告（CoA）。

推荐染色方案

以下为使用本试剂盒进行Th17染色的通用操作流程。具体批次所需体积和孵育时间请务必参阅产品说明书或数据表。

1. 细胞刺激（检测胞内细胞因子时）：在蛋白转运抑制剂（如布雷菲德菌素A或莫能菌素）存在的条件下，使用多克隆刺激物（如PMA和离子霉素）对外周血单个核细胞（PBMC）或全血进行刺激，37℃、5% CO₂条件下孵育4–6小时。此步骤用于将胞内IL-17A积累至可检测水平。
2. 表面染色：刺激后，洗涤细胞，用试剂盒中提供的表面标志物抗体（如抗CD4抗体）在4℃避光孵育20–30分钟。
3. 固定与破膜：使用试剂盒提供的固定液和破膜液对细胞进行固定和破膜处理，使胞内抗体得以进入胞浆靶标。
4. 胞内染色：将破膜后的细胞与胞内抗体（如抗IL-17A抗体）在破膜液中于室温或4℃避光孵育20–30分钟。
5. 洗涤与上机检测：用破膜液洗涤细胞两次，重悬于适当缓冲液中，在流式细胞仪上进行采集。请设置适当的补偿对照和荧光减一（FMO）对照。

在评估IL-17A阳性以界定Th17细胞群之前，应先在活的单细胞CD4⁺淋巴细胞群中进行设门。

常见问题排除

如遇到异常结果，请参考以下故障排除指导：

如上述措施未能解决问题，请携带批号和CoA联系Aladdin Scientific技术支持。

兼容性、面板设计与质量规格

Human Th17染色试剂盒（2-8℃组分）针对人源样本（外周血、PBMC或组织来源细胞）进行了优化。本试剂盒与非人灵长类或啮齿动物样本的交叉反应性尚未经过验证，请勿假设其适用性。

面板设计注意事项：

• 构建多色面板时，需考虑荧光素光谱重叠，确保将最亮的荧光素分配给表达量最低的标志物。
• 加入与固定步骤兼容的活/死细胞染料，以在分析中排除死细胞。
• 使用同型对照或FMO对照，准确设定面板中每种抗体的阴/阳性门。

质量规格：H1521238WT每批次均使用人供体PBMC通过流式细胞术进行质量控制。批次特异性性能数据，包括染色指数和预期群体频率，均记录于质量检验报告（CoA）中。产品在放行前已验证纯度、浓度及内毒素水平（如适用）。建议研究人员在开展实验前向Aladdin Scientific索取CoA。