背景：ICAD及其在细胞凋亡中的作用

ICAD，即Caspase激活的DNase抑制剂（在人类中亦称为DFF45），是内源性细胞凋亡通路中的关键调控蛋白。在正常生理条件下，ICAD作为CAD（Caspase激活的DNase，又称DFF40）的分子伴侣和抑制剂，使CAD维持在细胞质中的非活性复合物状态。

在细胞凋亡过程中，活化的Caspase-3在特定天冬氨酸残基处切割ICAD，从而释放具有活性的CAD核酸酶。游离的CAD随后转位至细胞核，在核小体连接区域切割染色体DNA，产生约180 bp的寡核小体DNA梯形条带，这是细胞凋亡的标志性特征。因此，检测和定量ICAD的切割状态可作为Caspase-3激活及细胞进入凋亡DNA片段化程序的直接分子读数。

ICAD的研究在肿瘤生物学、神经科学、免疫学及药物发现等领域具有重要意义，这些领域均关注凋亡通路的治疗性调控。

产品规格与配方

Aladdin Scientific的ICAD小鼠单克隆抗体（货号：Ab351249）是一种针对ICAD/DFF45蛋白的小鼠源单克隆抗体。单克隆形式确保了批次间的一致性和高表位特异性，这对于在复杂生物样品中实现可重复检测至关重要。

• 形式：小鼠单克隆抗体（IgG亚型请参阅说明书确认）
• 配方：仅以PBS（磷酸盐缓冲液）供应——基础配方中未注明甘油、BSA或叠氮化物防腐剂，使其与更广泛的下游偶联或功能性检测兼容
• 供应商参考编号：absea#KC-1231
• 货号：Ab351249

研究人员在实验使用前，应查阅完整产品说明书，以确认宿主种属、同型、免疫原序列、储存条件及浓度等详细信息。

推荐应用与使用指南

ICAD小鼠单克隆抗体专为需要检测ICAD/DFF45蛋白表达水平、含量或切割状态的标准免疫学检测而设计。此类抗体的典型应用包括：

• 蛋白质印迹（WB）：检测细胞或组织裂解物中全长ICAD（约45 kDa）和/或其Caspase-3切割片段，以评估细胞凋亡状态。
• 免疫共沉淀（IP）：分离ICAD–CAD复合物或单独的ICAD，用于下游共沉淀或活性研究。
• 免疫荧光（IF）/免疫细胞化学（ICC）：在凋亡刺激前后可视化ICAD的亚细胞定位。
• 酶联免疫吸附测定（ELISA）：定量检测细胞提取物中的ICAD水平。

注意：具体经验证的应用及工作稀释比例应以Ab351249官方产品说明书为准。以上列表代表ICAD单克隆抗体的常见用途，待说明书确认前仅供参考。

蛋白质印迹通用实验方案

以下是使用ICAD小鼠单克隆抗体进行蛋白质印迹检测ICAD的通用指南。请务必针对您的特定细胞或组织模型进行实验条件的经验性验证。

1. 样品制备：使用适当的裂解缓冲液（如含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液）裂解细胞。对于细胞凋亡研究，应避免使用可能在体外进一步激活Caspase的裂解缓冲液。采用BCA或Bradford法测定蛋白浓度。
2. 凝胶电泳：在变性还原条件下，于10–12% SDS-PAGE凝胶上每道上样20–40 µg总蛋白。ICAD迁移位置约为45 kDa；其Caspase-3切割产物将出现在较低分子量处。
3. 转膜：采用标准湿转或半干转印方案，将蛋白转移至PVDF或硝酸纤维素膜上。
4. 封闭：用5%脱脂奶粉或5% BSA的TBST溶液在室温下封闭膜1小时。
5. 一抗孵育：按制造商推荐稀释比例（参阅产品说明书），将ICAD小鼠单克隆抗体（Ab351249）稀释于封闭液中，4°C过夜孵育。
6. 二抗：用TBST洗膜3次，随后用适当的HRP偶联抗小鼠IgG二抗在室温孵育1小时。
7. 检测：用TBST洗膜3次，使用增强化学发光（ECL）底物检测信号。用胶片或数字成像系统成像。

始终应设置阳性对照（已知表达ICAD的细胞系）和上样量对照（如β-actin或GAPDH）。

储存、操作与质量注意事项

妥善储存和操作ICAD小鼠单克隆抗体对于维持抗体活性和确保实验结果的可重复性至关重要。

• 储存温度：请参阅产品说明书了解推荐储存温度（对于PBS配方且不含甘油的单克隆抗体，通常长期保存于–20°C）。
• 避免反复冻融：反复冻融循环会导致抗体蛋白变性并降低结合活性。收到后应立即分装，按单次使用量保存。
• 纯PBS配方：由于该抗体以不含甘油和叠氮化物的PBS供应，若在4°C长期储存，应采取额外措施防止微生物污染。建议进行过滤除菌或在4°C短期使用。
• 质量控制：Ab351249的每个批次均应附有确认反应性和特异性的质量控制数据。使用前请向Aladdin Scientific索取分析证书（CoA），以核实批次特异性性能数据。

如需有关ICAD小鼠单克隆抗体（Ab351249）的技术支持或订购咨询，请联系Aladdin Scientific客户服务团队。