KIR3DL1 小鼠单克隆抗体:筛选、应用及使用指南
KIR3DL1 小鼠单克隆抗体:筛选、应用及使用指南
KIR3DL1 Mouse mAb是一种以人KIR3DL1抑制性NK细胞受体为靶标的小鼠单克隆抗体,以PBS为溶剂提供,专为研究环境中KIR3DL1表达免疫细胞的精确检测与功能表征而设计。
- 产品编号
- Ab351272
- 抗体形式
- 小鼠单克隆抗体(mAb)
- 配方缓冲液
- 仅PBS(磷酸盐缓冲液)
- 靶抗原
- KIR3DL1(杀伤细胞免疫球蛋白样受体,三个Ig结构域及长胞质尾1)
- 宿主物种
- 小鼠
- 主要研究领域
- NK细胞生物学、固有免疫、移植免疫学
靶标概述:KIR3DL1及其生物学功能
KIR3DL1(杀伤细胞免疫球蛋白样受体,三个Ig结构域及长胞质尾1)是一种抑制性受体,主要表达于自然杀伤(NK)细胞及部分T淋巴细胞亚群。它属于编码于人类19q13.4染色体白细胞受体复合体(LRC)内的KIR基因家族。KIR3DL1识别携带Bw4血清学表位的HLA-B等位基因型,配体结合后通过其长胞质尾中的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)传递抑制信号,从而抑制NK细胞的细胞毒性及细胞因子产生。
KIR3DL1具有高度多态性,已报道多种等位基因变体,其表面表达水平及与HLA-Bw4配体的结合亲和力各异。这种多态性在造血干细胞移植、HIV疾病进展及肿瘤免疫监视研究中具有重要临床意义。研究NK细胞教育(许可化)、缺失自身识别及KIR-配体错配模型的科研人员通常需要可靠且经过验证的抗体来检测和定量初代细胞及细胞系中的KIR3DL1表达。
产品规格与配方指导
Aladdin Scientific KIR3DL1小鼠单克隆抗体(货号:Ab351272)仅以PBS(磷酸盐缓冲液)配制,除非质量检验报告(CoA)另有说明,否则不含载体蛋白、防腐剂或稳定剂。纯PBS配方具有多项实际优势:与大多数下游偶联化学方法直接兼容,避免BSA对细胞实验的干扰,并将灵敏检测系统中的背景信号降至最低。
推荐储存条件:短期使用(不超过1个月)时存放于2–8 °C。长期储存时应分装后保存于−20 °C或−80 °C,以避免反复冻融循环导致抗体活性下降。若抗体已与荧光团偶联,应避免长时间光照。
操作注意事项:开瓶前短暂离心以使内容物沉积于管底。稀释时建议使用含1% BSA的PBS或适合您实验的等效封闭缓冲液。若抗体用于功能实验或细胞活力检测,切勿在含叠氮化物的缓冲液中稀释,因叠氮化钠具有细胞毒性。
推荐应用与方案指导
具体的验证应用数据应以产品CoA和数据表为准,但靶向KIR3DL1的小鼠单克隆抗体广泛应用于以下实验:
- 流式细胞术(FC):对外周血单个核细胞(PBMC)或NK细胞系进行表面染色,以计数KIR3DL1阳性NK细胞亚群。流式细胞术典型工作浓度为0.5–5 µg/mL;建议对每批新货进行滴度优化。
- 免疫荧光(IF):检测固定免疫细胞或组织切片中的KIR3DL1。使用标准醛类固定剂;石蜡包埋组织可能需要进行抗原修复。
- 免疫沉淀(IP):从细胞裂解液中沉淀KIR3DL1蛋白复合物,用于后续蛋白质组学或共免疫沉淀研究。
- 蛋白质印迹(WB):在还原性SDS-PAGE条件下检测变性KIR3DL1。注意:针对天然表位制备的单克隆抗体在变性条件下信号可能减弱,请在数据表上确认适用性。
在进行流式细胞术和免疫荧光等应用时,应始终加入适当的同型对照(相同亚类的小鼠IgG)以评估非特异性结合。
常见问题排查
研究人员在使用KIR3DL1小鼠单克隆抗体时可能遇到以下问题,以下指导反映了此类单克隆抗体的通用最佳实践:
- 背景高/非特异性染色:提高封闭严格度(使用5%二抗宿主物种正常血清或1–3% BSA)。通过滴度优化抗体浓度。确保各孵育步骤之间充分洗涤。
- 信号弱或缺失:确认靶细胞是否表达KIR3DL1(KIR3DL1并非在所有NK细胞上普遍表达;表达具有等位基因和个体依赖性)。检查抗体批次活性——使用已知表达KIR3DL1的阳性对照细胞系(如YT细胞或来自KIR3DL1阳性供体的初代NK细胞)进行测试。确认抗体未因反复冻融而降解。
- 批间差异:每批新货均应重新滴度优化。向Aladdin Scientific索取批次特定CoA数据以比较结合活性。
- 纯PBS配方注意事项:在无载体蛋白的PBS中长期储存可能导致聚集。使用前在4 °C、10,000 × g离心5分钟以去除聚集体。
法规、安全与订购信息
KIR3DL1小鼠单克隆抗体(Ab351272)仅供科研用途(RUO),不用于诊断、治疗或兽医目的。该试剂尚未经监管机构评估用于临床程序。
安全性:按照研究级生物试剂的标准实验室生物安全规程操作。使用前请查阅Aladdin Scientific提供的安全数据表(SDS)。PBS配方不含需要特殊预防措施浓度的叠氮化钠等危险防腐剂,但用户应核实所收到特定批次的SDS。
订购:如需订购或索取Ab351272报价,请通过官网联系Aladdin Scientific或联系您所在地区的销售代表。大批量采购、定制偶联或OEM包装咨询可直接联系技术销售团队。请确保采购订单注明货号Ab351272以避免发货错误。
常见问题
KIR3DL1是什么?为什么它是重要的研究靶标?
KIR3DL1是一种抑制性NK细胞受体,可识别HLA-Bw4配体并通过ITIM介导的信号传递抑制NK细胞细胞毒性。该受体具有高度多态性,在移植、HIV研究和肿瘤免疫学中具有重要临床意义,是研究NK细胞功能和免疫调节的关键靶标。
KIR3DL1小鼠单克隆抗体为何仅以PBS配制?应如何储存?
纯PBS配方避免了载体蛋白(如BSA)在细胞实验和偶联实验中的干扰,最大程度兼容下游应用。短期使用时存放于2–8 °C;长期储存时应分装后冷冻于−20 °C至−80 °C;避免反复冻融以保持抗体完整性。
KIR3DL1染色适合使用哪些细胞类型作为阳性对照?
来自KIR3DL1阳性供体外周血的初代NK细胞以及YT等NK细胞系通常用作阳性对照。由于KIR3DL1的表达具有等位基因和供体依赖性,建议在将其用作对照前对供体或细胞系进行KIR3DL1状态基因分型。
Ab351272适用于蛋白质印迹(Western blot)实验吗?
靶向KIR3DL1的小鼠单克隆抗体可在变性SDS-PAGE条件下用于蛋白质印迹,但若抗体克隆针对构象表位,灵敏度可能下降。用户应在产品数据表或CoA上确认应用适用性,并加入适当的阳性对照裂解液。
在流式细胞术中使用KIR3DL1小鼠单克隆抗体时,如何降低非特异性背景?
为降低背景信号,在一抗孵育前用5–10%二抗宿主正常血清或Fc受体封闭试剂封闭样品。将抗体滴度优化至最适工作浓度,设置匹配的同型对照,并确保各孵育步骤之间充分洗涤。
参考文献
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- Moretta A, et al. Activating receptors and coreceptors involved in human natural killer cell-mediated cytolysis. Annual Review of Immunology. 2001;19:197-223. doi:10.1146/annurev.immunol.19.1.197
- Vilches C, Parham P. KIR: diverse, rapidly evolving receptors of innate and adaptive immunity. Annual Review of Immunology. 2002;20:217-251. doi:10.1146/annurev.immunol.20.092501.134942
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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