髓鞘是包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，即髓鞘由髓鞘细胞的细胞膜组成；目前研究注意髓鞘成分的抗原性，如：髓鞘碱性蛋白（MBP）、髓鞘相关醣蛋白（MAG）、髓鞘少突胶质细胞醣蛋白（MOG）等。

操作方法

LFB髓鞘染色法

原理

劳克坚牢蓝(LuxolFastBlue,LFB)属于铜－酞箐染料，在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。

材料与仪器

髓鞘
LFB溶液 0.05%碳酸锂溶液 0.25%焦油紫溶液
滤器

步骤

1、切片经蒸馏水清洗后，入0.1% LFB溶液，于60℃密封浸染8-16h。

2、经蒸馏水清洗后，入95%酒精。

3、以0.05%碳酸锂水溶液分色10s以上。

4、经70%酒精继续分色，直至显微镜下观察灰、白质区分清晰为止。

5、 蒸馏水洗片后，用0.25%焦油紫溶液加数滴冰醋酸染液复染10min。

6、70%酒精将复染颜色分至细胞核及尼氏体呈红色。

7、滤纸沾尽多余液体，入正丁醇2次漂洗脱水，每次脱水时间3-5min。

(8)二甲苯透明，中性树胶封片。髓鞘呈鲜蓝色，核呈深蓝色

注意事项

1、切片若为石蜡切片，要在二甲苯中先脱蜡，再至无水乙醇。

2、0.05%碳酸锂水溶液分色应该在显微镜下进行，至背景呈灰色为止。

70%酒精再次分色时，至背景无色为止。

常见问题

1、LFB染色完后，可用焦油紫溶液或苏木素－伊红复染，这样能更好地显示出细胞的形态。

2、复染之后要入正丁醇漂洗脱水，这样染色效果更佳。

3、溶液配制：劳克坚牢蓝1g,95%酒精100ml,10%冰醋酸0.5ml。混匀后过滤，室温保存。

来源：《神经生物学实用实验技术》

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