材料与试剂

开始操作前，请确保以下材料准备齐全：

• 甲硝唑（阿拉丁科学，货号：M109874）
• 适宜溶剂：超纯水、DMSO或PBS（pH 7.4），根据实验用途选择
• 分析天平（读数精度 ≤ 0.1 mg）
• 容量瓶或微量离心管（棕色瓶或锡箔纸包裹以避光）
• 0.22 µm无菌注射器过滤器（细胞培养实验适用）
• 个人防护装备（实验服、丁腈手套、护目镜）

注意：甲硝唑对光敏感，所有配制和储存容器均应避免直接光照。

储备液配制

按照以下步骤配制适用于大多数研究应用的甲硝唑储备液：

1. 计算所需质量：确定目标储备液浓度（通常为50–100 mM）和体积，按以下公式计算所需质量：质量（mg）= 浓度（mM）× 体积（mL）× 分子量（g/mol）÷ 1000。例如，配制10 mL DMSO中的50 mM溶液：质量 = 50 × 10 × 171.16 ÷ 1000 = 85.6 mg。
2. 称量化合物：将棕色玻璃瓶置于分析天平上去皮，准确称取所需质量的甲硝唑粉末。
3. 加入溶剂：加入目标体积约80%的溶剂（高浓度储备液使用DMSO；水溶性储备液使用超纯水或PBS，浓度上限约10 mg/mL）。轻柔涡旋30–60秒至完全溶解。
4. 定容至终体积：转移至容量瓶中，用相同溶剂定容至终体积，倒置混匀。
5. 过滤除菌（细胞培养用）：用0.22 µm注射器过滤器将溶液过滤至无菌棕色收集管中。
6. 验证溶解状态：目视确认溶液澄清、无颗粒后方可使用。

提示：将DMSO储备液稀释至水性培养基时若出现沉淀，可将水溶液短暂加热至37°C并涡旋以改善溶解性，或将终DMSO浓度控制在 ≤ 0.1%（v/v）以适用于细胞实验。

工作液配制与应用

甲硝唑工作液应在使用前即时将储备液稀释至适宜的实验培养基中配制。

体外实验（细胞培养）

• 将DMSO或水性储备液稀释至完全培养基，达到所需工作浓度（细胞毒性研究典型范围：10–500 µM；具体浓度因细胞系和实验目的而异）。
• 终DMSO浓度不得超过0.1%（v/v），以避免溶剂相关细胞毒性。应同时设置相同DMSO浓度的溶剂对照组。
• 尽量在实验当天现配现用工作液。

体内实验（动物实验）

• 经饮水口服给药（常用于肠道微生物组耗竭研究）时，将甲硝唑溶于高压灭菌饮用水至目标浓度。饮水瓶应避光保存，溶液每2–3天更换一次。
• 注射给药时，配制无菌水溶液或生理盐水溶液，并进行过滤除菌。使用前确认所选溶媒与给药途径的相容性。

开展体内实验前，务必遵循所在机构的动物护理和使用管理规定。

储存与稳定性

妥善储存对于维持甲硝唑活性和溶液完整性至关重要。

• 固体粉末：密封避光、防潮，室温（15–25°C）储存。储存条件适宜时，保质期通常可达数年。
• DMSO储备液：分装为单次用量，避免反复冻融。避光，–20°C储存，此条件下稳定期最长可达6个月。
• 水溶性储备液：尽量现配现用。如需储存，于4°C避光保存，一周内使用完毕。不建议长期储存水溶液，因可能发生水解降解。
• 培养基中的工作液：当天配制，当天使用，不得储存。

审核标注：DMSO及水溶液的具体稳定期应经验证稳定性数据确认；本文所述时间仅为基于理化性质的一般性指导。

安全与操作注意事项

基于动物实验数据，甲硝唑被归类为潜在致突变物和可能致癌物（IARC第2B类）。在研究实验室中须采取以下预防措施：

• 在通风良好区域或生物安全柜中操作（视情况而定）。
• 全程佩戴适宜的个人防护装备：实验服、丁腈手套（处理高浓度溶液时建议双层手套）及护目镜。
• 称量粉末时避免产生粉尘，建议使用天平防风罩。
• 所有含甲硝唑的废弃物（溶液、污染材料）须按照所在机构及监管部门的危险废物处置规定进行处理。
• 完整的危险信息、急救措施及处置要求，请参阅阿拉丁科学提供的安全数据表（SDS，货号：M109874）。

注意：IARC第2B类分类应以最新版SDS为准。操作要求可能因地区监管规定而有所不同。