MH Broth:成分、用途与抗菌药物敏感性测试
MH Broth:成分、用途与抗菌药物敏感性测试
MH Broth是一种标准化液体细菌培养基,专为支持多种非苛养微生物的生长而配制,并作为符合CLSI和EUCAST指南的微量肉汤稀释法抗菌药物敏感性测试的参考培养基。
- 全称
- Mueller Hinton肉汤
- 主要用途
- 微量肉汤稀释法最低抑菌浓度(MIC)测定,用于抗菌药物敏感性测试
- 主要成分
- 牛肉浸出物、酪蛋白酸水解物(酪蛋白水解物)及淀粉
- 推荐标准
- CLSI M07及EUCAST抗菌药物敏感性测试指南
- 灭菌后pH值
- 25°C下7.2–7.4(高压灭菌后需验证)
- 培养条件
- 35–37°C,有氧条件,大多数微生物培养16–20小时
什么是MH Broth?
Mueller Hinton(MH)肉汤是一种非选择性、非差异性液体培养基,最初由Mueller和Hinton于1941年开发,用于奈瑟菌属的培养。此后数十年间,它成为美国临床和实验室标准协会(CLSI)及欧洲抗菌药物敏感性测试委员会(EUCAST)推荐的体外抗菌药物敏感性测试(AST)微量肉汤稀释法的通用培养基。
该培养基能够可靠、重复地支持大多数临床相关非苛养需氧菌及兼性厌氧菌的生长,是指导抗生素治疗所需最低抑菌浓度(MIC)测定的基石。
成分与配制
MH Broth的经典配方包含三种主要成分:
- 牛肉浸出物——提供氨基酸、核苷酸、维生素及碳源,是细菌生长的必要物质。
- 酪蛋白酸水解物(酪蛋白水解物)——提供丰富的多肽和游离氨基酸,支持细菌快速增殖。
- 淀粉——吸收有毒代谢副产物,防止其抑制细菌生长并干扰抗生素活性。
配制MH Broth时,将脱水粉末按厂商规定浓度溶于纯净水(优选蒸馏水或去离子水),充分混匀后于121°C高压灭菌15分钟。灭菌后需确认25°C时pH为7.2–7.4。制备好的培养基应在2–8°C保存,并在厂商推荐的有效期内使用。
注意:各成分的具体克/升数值请参照Aladdin Scientific产品编号M1528409附带的批次专属质量检验报告(CoA)。
在抗菌药物敏感性测试中的应用
MH Broth是CLSI(文件M07)和EUCAST指定用于微量肉汤稀释法MIC测试的参考培养基。在该方法中,抗菌药物在96孔板的MH Broth中进行两倍梯度稀释。将经标准化的细菌接种物(通常调节至0.5麦氏浊度标准,约1–2×108 CFU/mL,再进一步稀释至孔内终浓度约5×105 CFU/mL)加入各孔。于35–37°C培养16–20小时后,记录肉眼可见抑制细菌生长的最低抗菌药物浓度,即为MIC。
MH Broth胸腺嘧啶和胸腺嘧啶脱氧核苷含量较低,以防止对磺胺类药物和甲氧苄啶活性的拮抗。培养基中钙、镁阳离子浓度对氨基糖苷类和四环素类药物的MIC结果至关重要;CLSI规定,测试这些药物时应使用阳离子调节Mueller Hinton肉汤(CAMHB),即含Ca2+(20–25 mg/L)和Mg2+(10–12.5 mg/L)的培养基。
对于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养微生物,根据CLSI指南,需使用补充型培养基(如含2–5%溶血马血的MH Broth或流感嗜血杆菌测试培养基)。
质量控制与故障排查
稳定的MIC结果依赖于严格执行质量控制(QC)规程。CLSI和EUCAST均规定了QC参考菌株及在报告患者或研究结果前必须满足的可接受MIC范围。常用QC菌株包括金黄色葡萄球菌ATCC 29213、大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853和粪肠球菌ATCC 29212。
常见误差来源包括:
- pH不正确——pH超出7.2–7.4范围可导致MIC值偏移;高压灭菌后务必验证pH。
- 接种量不当——起始接种量过高或过低将分别导致MIC读数假性偏低或偏高。
- 阳离子失衡——测试氨基糖苷类和四环素类药物时,未使用阳离子调节肉汤是结果差异的常见原因。
- 污染——使用前应目视检查配制好的培养基是否出现浑浊或颗粒物。
- 储存不当——培养基储存温度高于8°C或超过有效期可能导致性能下降。
从Aladdin Scientific订购MH Broth
Aladdin Scientific提供MH Broth(产品编号:M1528409),供研究和实验室使用。该产品按照抗菌药物敏感性测试的成分要求配制,并附有质量检验报告(CoA),确认关键质量参数,包括pH、外观及性能测试数据。
研究人员和采购团队应确认特定批次符合适用的法规或认证要求。如需批量报价、定制包装规格或技术咨询,请联系Aladdin Scientific技术支持团队。订购可直接通过Aladdin Scientific官网或机构采购门户完成。
常见问题
MH Broth有什么用途?
MH Broth主要用作微量肉汤稀释法抗菌药物敏感性测试(AST)的参考培养基,用于测定抗生素对细菌病原体的最低抑菌浓度(MIC)。它也可用于非苛养需氧菌及兼性厌氧菌的常规培养。
MH Broth与阳离子调节Mueller Hinton肉汤(CAMHB)有何区别?
CAMHB是MH Broth的一种改良版本,其中二价阳离子(特别是钙离子20–25 mg/L和镁离子10–12.5 mg/L)的浓度精确调节至CLSI规定水平。CAMHB是氨基糖苷类和四环素类药物MIC测试的必要培养基,因为阳离子浓度显著影响这些药物的活性;未经阳离子调节的标准MH Broth可能对这些抗生素产生不可靠的结果。
MH Broth能否用于链球菌或流感嗜血杆菌等苛养微生物?
标准MH Broth不能充分支持苛养微生物的生长。对于肺炎链球菌及其他链球菌,CLSI建议在MH Broth中补充2–5%溶血马血。对于流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌,则需使用流感嗜血杆菌测试培养基(HTM)。请始终参照最新CLSI或EUCAST指南中针对特定微生物的培养基要求。
配制后的MH Broth应如何储存?
配制好的MH Broth应在2–8°C(冷藏)条件下密封避光保存,并在厂商规定的有效期内使用。脱水粉末应存放于阴凉干燥处,容器密封以防吸潮。
MH Broth为何含有淀粉?
MH Broth中的淀粉作为吸附剂,用于中和培养基中可能存在的有毒脂肪酸及其他抑制性物质,以及细菌代谢产生的副产物。这有助于维持稳定的生长环境,减少由非抗生素抑制引起的假敏感结果。
参考文献
- Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically. CLSI standard M07. Wayne, PA: CLSI.
- European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Available at: eucast.org.
- Mueller JH, Hinton J. A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc Soc Exp Biol Med. 1941;48:330–333.
- Wiegand I, Hilpert K, Hancock REW. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances. Nat Protoc. 2008;3(2):163–175. doi:10.1038/nprot.2007.521
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
危险品化学品经营许可证(带存储)