微核试验（MicronucleusTest）是70 年代初发展起来的快速、简便检测环境致癌物的方法。微核是在间期细胞时能观察到的染色体畸变后遗留物，在癌症患者末梢血淋巴细胞胞浆中，表现有一定的规律性。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

操作方法

微核检测实验

原理

遗传毒物或致突变因子作用于间期细胞染色质，有丝分裂染色体和纺锤体时，能导致染色体断裂成断片或整条染色体从纺锤体脱落和染色体子星群脱离，形成落后的孤立染色体，继而在分裂末期及以后的间期细胞中形成与主核脱离的徽核。因此微核实质上是孤立畸变染色体在间期的存在形式。微核检测既可直接检测体内细胞，亦可利用培养细胞进行检测。

材料与仪器

静脉血 血清
肝素 培养液 Eagle PHA 甲醇 冰醋酸 Giemsa 甲基纤维素 明胶
方瓶 离心机 沉淀管

步骤

1.  方法一

（1）采血

静脉采血0.5 ml，肝素抗凝，用小方瓶培养，加培养液5 ml；

培养液组成为：含20 %小牛血清的Eagle液，加PHA 40 μg/ml；

（2）培养

置37 ℃温箱培养48 或72 小时，以1000 rpm离心8 分钟；

（3）固定

3 L 1甲醇/冰醋酸固定3 次，每次15 分钟，离心沉淀固定液；

（4）制片

冷冻载片滴片法制片、自然干燥；10 %Giemsa（pH6.8）染色15 分钟。

2.  方法二
  （1）采血

肝素抗凝血0.5～0.6 ml，置10 ml试管中，加入血量一半的0.5 %甲基纤维素，充分混合；

（2）培养

置37 ℃温箱静置培养30 分钟，以2000 rpm离心10 分钟，去上清液；

（3）制片

做涂片，Wright法染色。

3.  方法三

（1）采血

用三棱针刺无名指取血0.6 ml，立即注入内径3 mm、长5 cm的血液沉淀管中，用小玻棒搅拌除去纤维蛋白；

（2）加明胶

加入3 %的明胶（其量为血量的1/3或1/2），小心混匀，置37 ℃温箱自然沉降50 分钟；

（3）吸去上清液、离心、沉淀物涂片、自然干燥、Wright染色30 分钟、再用Giemsa染色2 分钟。

注意事项

1.  微核法简便易行，但仅适用于检测那些在细胞分裂时对纺锤体和染色体有影响的有关因素。

2.  对毒性小的物质可能不很敏感；微核检出率约有30 %的误差。

常见问题

一、凡具分裂能力易于获得的培养细胞以及很多其它细胞都可用于显示微核

1.  人末梢血淋巴细胞培养

对检测环境中致突和致癌物非常简便和有效，对预报危害人体有害因素有重要意义。

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