材料与设备

开始操作前，请准备以下材料：

• 单分散荧光聚苯乙烯微球（产品编号：M122074）
• 磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）或去离子水（用于稀释）
• 涡旋混合仪
• 微量离心管（1.5 mL）
• 微量移液器及校准移液头
• 流式细胞仪或荧光显微镜（与微球激发/发射波长匹配）
• 一次性手套、实验室工作服及护目镜

注意：在选择仪器滤光片组合前，请务必从随附的质量检验证书（CoA）中确认您所用批次的激发和发射波长最大值。

制备与稀释方案

按以下步骤制备单分散荧光微球工作悬液：

1. 恢复至室温：将原液小瓶从4 °C储存环境中取出，在开盖前于室温（18–25 °C）平衡约10分钟。
2. 重悬原液：轻轻涡旋原液小瓶10–15秒，确保悬液均匀。避免长时间或高速涡旋，以防微球聚集。
3. 制备工作稀释液：使用PBS或去离子水将原液稀释至所需工作浓度。对于大多数流式细胞术应用，终浓度通常约为10⁶–10⁷个微球/mL；请根据仪器和实验需求进行实验优化。
4. 轻柔混匀：使用前立即将稀释后的悬液颠倒混匀或短暂涡旋，确保均一性。
5. 避免反复冻融：若预计需多次取样，建议分装为单次使用量，并在4 °C避光保存。

提示：在工作缓冲液中加入0.02%叠氮化钠有助于防止长期储存过程中微生物生长；但请确认其与下游检测需求的相容性。

应用操作步骤

流式细胞术校准：

1. 运行空白对照（仅含稀释液），建立散射光和荧光本底参数。
2. 以推荐浓度引入微球工作悬液，采集至少5,000–10,000个事件。
3. 利用微球群体设定电压、调节补偿，并验证相关荧光通道的仪器线性。
4. 记录中位荧光强度（MFI）值，用于仪器长期追踪。

荧光显微镜：

1. 吸取5–10 µL工作微球悬液，滴加于洁净载玻片或盖玻片上。
2. 如需永久封片，盖上盖玻片后用透明指甲油或封片剂封边。
3. 使用与微球荧光团相匹配的激发滤光片进行成像。
4. 将微球用作尺寸参考或点扩散函数（PSF）标准，进行分辨率校准。

故障排除

安全与废弃物处理

安全：单分散聚苯乙烯微球通常被认为是低危害试剂，但仍须遵守标准实验室操作规范。操作时请佩戴丁腈手套、实验室工作服及护目镜，避免产生气溶胶。如需完整危害信息，请查阅产品编号M122074的安全数据表（SDS）。

废弃物处理：按照所在机构的化学废弃物处置法规处理微球悬液及受污染材料。聚苯乙烯为合成聚合物，未经确认符合当地法规前，请勿将高浓度原液直接倒入下水道。