本实验方法来源于重庆医科大学官方网站

操作方法

细胞的吞噬活动与矽肺发生的形态学观察实验

原理

高等动物体内存在着具有防御功能的吞噬细胞系，其中粒细胞和单核细胞的吞噬能力最强，故称吞噬细胞，这些细胞随血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。 当机体受到异物入侵时，巨噬细胞在趋化因子的作用下向异物移动，然后伸出伪足包裹异物，将异物吞入细胞内形成吞噬泡，与溶酶体合并成次级溶酶体，通过溶酶体内的酸性水解酶将异物消化分解。目前认为肺泡内的巨噬细胞在矽肺的发病过程中起关键性作用。当含有SiO2矽尘颗粒被吸入肺部后，被肺泡内的巨噬细胞吞噬，形成吞噬泡，与溶酶体合并后形成次级溶酶体，由于矽尘颗粒中含有SiO2，其表面的羟基与溶酶体膜的磷脂或蛋白质形成氢键，从而改变溶酶体膜的稳定性，引起溶酶体膜崩解，水解酶释放，最后导致巨噬细胞溶解、死亡、而含有SiO2矽尘颗粒释放，再次被其他巨噬细胞吞噬，如此反复进行。巨噬细胞大量死亡，其死亡时释放出的致纤维化因子，激活成纤维细胞，导致胶原纤维增生。同时，巨噬细胞死亡时释放出来的二氧化硅也可作为抗原，刺激免疫活性细胞，产生抗体，抗原抗体反应产生复合物和补体一起，沉积在胶原纤维上，使新形成的结缔组织呈透明样外观。

材料与仪器

公鸡静脉血 成年小鼠
Alsever溶液 生理盐水 淀粉肉汤
显微镜 注射器 载片 盖片

步骤

1、实验前两天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1ml（起标记作用），以诱导腹腔产生更多的巨噬细胞。

2、实验时，每四个同学取一只经过上述处理的小鼠，腹腔注射1%的鸡血细胞悬液1ml。

3、30min后，再向腹腔注射0.5ml小鼠生理盐水。

4、 30min后，颈椎脱位法处死小鼠。

5、用注射器取腹腔液滴片，盖上盖片。

6、显微镜观察

常见问题

1. Alsever溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml双蒸水中。

2. 6%淀粉肉汤：牛肉膏0.3g蛋白胨 1.0g氯化钠0.3g台盼蓝(Trypan blue)粉0.3g

3. 蒸馏水 100ml煮沸灭菌，置4℃冰箱保存。

4. 小鼠生理盐水0.85g氯化钠溶于100m1蒸馏水中

5. 鸡生理盐水0.75g氯化钠溶于100m1蒸馏水中

6. 1% 鸡红细胞悬液自健康鸡翼静脉采血或从集市杀鸡处接血2ml(防止污染)，放入盛有8ml AlseVer溶液瓶中，混匀置4℃冰箱保存备用(一周内使用)。使用前加入0.85％生理盐水离心(1 500r／min 10min)洗涤二次，再用生理盐水配成l％浓度悬液。

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