NFAT5概述与抗体规格

NFAT5，又称TonEBP（张力响应增强子结合蛋白），是属于Rel同源结构域超家族的转录因子。与其他NFAT家族成员不同，NFAT5不受钙调磷酸酶依赖性钙信号调控，而是由高渗应激激活，通过诱导编码渗透物转运体和生物合成酶的基因表达，在细胞渗透保护中发挥核心作用。

NFAT5小鼠单克隆抗体（Ab351130）是在小鼠体内制备的单克隆抗体，靶向NFAT5蛋白，以纯PBS配方提供（absea参考编号KC-641），可直接稀释至检测缓冲液中使用，也兼容后续偶联标记操作。单克隆抗体的特性确保了批次间的一致性和对NFAT5表位的高度特异性。

所需材料与仪器设备

• NFAT5小鼠单克隆抗体（Ab351130），PBS配方
• 含NFAT5蛋白的适当细胞裂解液或组织匀浆
• 标准免疫检测缓冲液：TBST或PBST（含0.1% Tween-20）
• 封闭试剂：TBST中含5%脱脂奶粉或BSA
• 二抗：抗小鼠IgG偶联HRP或荧光染料
• 与二抗标记物相对应的检测底物
• 微量离心机、SDS-PAGE电泳装置、PVDF或硝酸纤维素膜（用于蛋白质印迹）
• 根据应用需要配备显微镜或酶标仪
• 裂解缓冲液制备用蛋白酶抑制剂混合物

注意：具体稀释比例和缓冲液条件应根据每种应用和样品类型进行实验性优化。

分步操作方案

1. 抗体制备

将NFAT5小鼠单克隆抗体（Ab351130）在冰上解冻，轻柔吹打混匀，勿涡旋振荡。低速短暂离心以收集液体。在使用前立即在适当的检测缓冲液中配制工作稀释液。由于该抗体以纯PBS提供（不含甘油或BSA等稳定剂），建议首次使用前分装，以减少反复冻融次数。

2. 样品制备

使用添加蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液制备细胞或组织裂解液，采用BCA或Bradford法定量总蛋白。用于蛋白质印迹时，将样品在SDS上样缓冲液中95°C变性5分钟，经SDS-PAGE电泳分离后转膜至PVDF或硝酸纤维素膜。

3. 封闭

用含5%脱脂奶粉或3–5% BSA的TBST在室温下封闭膜或切片1小时，轻柔振荡，以减少非特异性结合。

4. 一抗孵育

将NFAT5小鼠单克隆抗体用封闭液稀释至推荐工作浓度，与膜或样品在4°C轻柔振荡孵育过夜，随后用TBST洗涤三次，每次5分钟。

5. 二抗孵育与检测

在室温下与适当的抗小鼠IgG二抗孵育1小时，用TBST洗涤三次，按照二抗制造商说明加入检测底物并成像。

储存、处理与故障排除

储存

NFAT5小鼠单克隆抗体应在–20°C长期储存；短期使用（不超过1个月）可在4°C保存。由于纯PBS配方不含甘油等冻存保护剂，收到产品后应立即分装为单次用量后再冻存，以防止反复冻融导致活性损失。

操作注意事项

抗体操作应始终在冰上进行，避免长时间暴露于室温。若抗体溶液出现浑浊或可见沉淀，应先离心再检测活性后方可使用。

故障排除