非特异性酯酶（Nonspecific，esteras。NSE）染色法又可分为三类：中性非特异性酯酶，酸性非特异性酯酶及碱性非特异性酯酶染色法；血细胞的非特异性酯酶及其同工酶种类很多，凡作用于短链脂肪酸的酶均称为非特异性酯酶．中性非特异性酯酶染色法由于底物不同可分为α－乙酸萘酚酯酶染色法，乙酸等AS酸酶染色法及乙酸萘酚AS-D酯酶染色法三种，现介绍α－乙酸萘酚酯酶（α－NAE）。本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

非特异性酯酶染色实验

原理

NAE将α－乙酸萘酚水解，产生α－萘酚，再与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。

材料与仪器

磷酸盐缓冲液 α－乙酸萘酚 加重氮盐 甲基绿水港派

步骤

一、 实验试剂：

1. 作用液：l／20mol／L  磷酸盐缓冲液（PH7.4）40mg加10g／Lα－乙酸萘酚（以50％丙酮做溶剂）0.8ml，充分振荡，直至最初产生的混浊物大部分消失为止，加重氮盐，（坚牢蓝B或其他种均可）40mg振荡，过滤后使用．

2. 1g／L甲基绿水港派

二、 实验操作：

l. 固定新鲜涂片置10％甲醛生理盐水固定5min

2. 流水冲洗5min

3. 加入37℃作用液中1小时

4. 水洗

5. lg/L甲基绿水溶液复染5min

6. 水洗，干后镜检．

NaF抑制试验：方法同上，在 40ml作用液中加入氟化钠（NaF）6mg（每毫升作用液加NaF－l.5mg），若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制最好能计算NaF抑制率，其公式为：

（加NaF后NSE积分值/未加NaF时的NSE积分值）×100％凡抑制率＞50％者，提示确受NaF所抑．四. 实验判定结果：细胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性，胞质内无沉淀者为阴性．

常见问题

1. 标本必须新鲜，应于取材后两天内染色，否则酶的活性显著降低．若冰箱内保存，可适当延长保存时间．

2. 重氮盐的选择，以坚固蓝B．坚固蓝RR及坚固黑B重氮盐的染色为好．

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