Oil Orange SS:性质、应用与实验室使用指南
Oil Orange SS:性质、应用与实验室使用指南
Oil Orange SS是一种亲脂性偶氮染料,广泛应用于组织学和细胞生物学领域,用于选择性染色组织切片和培养细胞中的中性脂质、甘油三酯及脂蛋白。
- 化学类别
- 偶氮染料(亲脂性,油溶性)
- 货号
- O1501139
- 主要应用
- 用于组织学和细胞生物学中中性脂质及脂肪组织的染色
- 溶解性
- 溶于油脂、脂肪及有机溶剂;在水中溶解度低
- 染色原理
- 基于差异溶解度,优先分配至富含脂质的区域
- 适用切片类型
- 冷冻切片(冷冻薄切片);避免有机溶剂提取脂质
化学特性与理化性质
Oil Orange SS属于偶氮染料家族,具有高度亲脂性。其常见同义词包括Sudan Orange SS和Fat Orange SS。该化合物溶于油脂、脂肪、蜡及多种有机溶剂,但在水中溶解度极低。这种差异溶解度是其作为脂质染料的应用基础:染料从含水或半含水溶剂体系中分配进入样品中的富脂区域,在脂质集中的区域产生特征性橙色显色。
该染料通常以橙红色粉末或晶体固体形式供应。储备液常以异丙醇或丙二醇配制,再用水稀释制成工作染色液。染料的精确吸收峰可能因溶剂环境不同而有所差异;注意:确切的λmax值应以产品质量检验报告为准。
脂质染色机制
与免疫组化或酶促染色方法不同,Oil Orange SS依靠纯粹的物理化学机制发挥作用。该染料在脂质中的溶解度高于在其传递组织所用的含水或含醇溶剂中的溶解度。当切片浸入工作液时,染料沿其浓度梯度迁移进入切片中存在的脂滴、膜结构或脂蛋白沉积处,形成稳定、深色的橙色沉积,精准定位于富脂结构。
由于该机制依赖溶解度分配而非共价结合,因此必须使用冷冻切片(冷冻切片机切片)而非石蜡包埋材料。常规石蜡处理涉及二甲苯等有机溶剂,会溶解并去除染色目标脂质。冷冻切片可原位保留中性脂质、甘油三酯、胆固醇酯及其他非极性脂质。
染色方案概述
以下为Oil Orange SS染色的一般操作指南。请始终参考具体产品文档,并根据您的组织类型和研究需求对条件进行优化。
- 切片制备:用冷冻切片机将新鲜冷冻组织切成8–12 µm厚的切片,贴于正电荷或明胶包被的载玻片上,室温下短暂风干。
- 固定:在10%中性缓冲福尔马林(NBF)中固定5–10分钟,再用蒸馏水短暂漂洗。避免过长时间固定。
- 工作液配制:将Oil Orange SS溶于99%异丙醇中配制饱和储备液,过滤备用。使用前用蒸馏水稀释(通常异丙醇:水约3:2,v/v),再次过滤。
- 染色:将载玻片浸入过滤后的工作液中,室温孵育10–15分钟,孵育时间可能需要优化。
- 分色与漂洗:用蒸馏水短暂漂洗,去除多余染料。
- 复染(可选):用Mayer苏木精复染细胞核1–2分钟,流水返蓝。
- 封片:使用水性封片剂封片;切勿使用含二甲苯或有机溶剂的封片剂,否则会溶解染料。
结果:脂滴和中性脂质沉积呈橙色;细胞核(如复染)呈蓝色。
科研应用
Oil Orange SS广泛应用于需要可视化和定量分析细胞内或组织脂质的各类研究场景:
- 脂肪肝(肝脂肪变性)研究:检测和分级肝组织切片中的脂质积累,常用于饮食、毒理学及代谢病模型。
- 脂肪组织表征:可视化白色和棕色脂肪细胞中的脂滴,用于脂肪细胞生成及能量代谢研究。
- 动脉粥样硬化研究:鉴定动脉斑块切片中含脂的泡沫细胞和脂质核心。
- 体外细胞实验:对经分化或脂肪酸负荷处理的培养细胞(如肝细胞、脂肪细胞、巨噬细胞)中的脂滴进行染色;可通过提取后分光光度法或数字图像分析进行定量。
- 脂滴生物学:在设计适当的复染方案时可配合荧光显微镜使用,但请注意Oil Orange SS本身不具有荧光性。
其较低的成本和简便的操作方案使其在许多实验室场景中成为Oil Red O的实用替代品或补充试剂。
安全、操作与储存
与所有偶氮染料一样,操作Oil Orange SS时应采取适当的安全防护措施:
- 个人防护装备(PPE):佩戴丁腈手套、实验服和护目镜。该染料会污染皮肤和衣物。
- 通风:在通风良好的区域或通风橱中操作粉末和浓缩溶液,以减少细颗粒的吸入。
- 有机溶剂安全:工作液通常含异丙醇;遵循标准易燃溶剂防护规程,远离明火和热源。
- 废弃处置:按照机构和地方法规对含染料的溶液及污染材料进行化学废物处置。
- 储存:将干燥粉末储存于阴凉、干燥、通风良好的地方,避免光照、氧化剂和点火源。使用后密封保存,防止吸潮。具体储存温度和有效期请以产品标签和质量检验报告为准。
注意:使用前请务必查阅随产品提供的安全数据表(SDS),以获取完整的危害信息。
常见问题
Oil Orange SS与Oil Red O有何区别?
Oil Orange SS和Oil Red O均为亲脂性偶氮染料,均用于冷冻组织切片中中性脂质的染色,且具有相似的物理化学染色机制。Oil Red O产生红色,在文献中引用更为广泛;Oil Orange SS产生橙色。两者的选择取决于所需的与复染剂的颜色对比、仪器滤光片设置或实验室偏好。两者均需冷冻切片和水性封片。
Oil Orange SS能否用于石蜡包埋组织切片?
不能。Oil Orange SS不适用于常规石蜡包埋切片。石蜡处理需要用二甲苯等有机溶剂进行脱水和透明处理,这些溶剂会溶解并去除中性脂质——即本染料的染色靶标。必须使用冷冻切片以原位保留脂质,方可有效染色。
如何配制Oil Orange SS工作液?
常用方法是:将Oil Orange SS在99%异丙醇中搅拌溶解,制成饱和储备液,再经Whatman No.1滤纸过滤。工作液通过将过滤后的储备液用蒸馏水稀释制备(典型比例约为储备液:水 = 3:2,v/v),使用前立即再次过滤以去除沉淀。确切比例应根据每批产品和组织类型进行优化。
Oil Orange SS是否适用于脂质含量的定量分析?
适用。Oil Orange SS染色的脂质可通过异丙醇提取染色细胞或组织中结合的染料,再进行分光光度法定量,原理与Oil Red O定量检测类似。对染色切片进行数字图像分析也是常用的定量方法。两种方法均需适当的对照和标准化处理。
Oil Orange SS染色后应使用何种封片剂?
仅应使用水性封片剂。含有机溶剂或二甲苯的封片剂会溶解油溶性染料,导致染色消失。甘油明胶或其他水溶性封片剂是合适的选择。
参考文献
- Lillie RD, Ashburn LL. Supersaturated solutions of fat stains in dilute isopropanol for demonstration of acute fatty degeneration not shown by Herxheimer's technique. Archives of Pathology. 1943;36:432–440.
- Bancroft JD, Gamble M, eds. Theory and Practice of Histological Techniques. 6th ed. Churchill Livingstone; 2008. Chapter on lipid histochemistry.
- Mehlem A, Hagberg CE, Muhl L, Eriksson U, Falkevall A. Imaging of neutral lipids by oil red O for accurate quantification of adipogenesis in human mesenchymal stem cells. Nature Protocols. 2013;8(6):1149–1154. doi:10.1038/nprot.2013.079
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