实验方案（Protocols）

奥里多宁处理与测定方案 | 仅限研究用途

· · 发布于 2026年9月29日 · 更新于 2026年9月29日 ·

Oridonin是一种从冬凌草中分离的具有生物活性的对映贝壳杉烷型二萜类化合物，作为工具化合物被广泛用于研究细胞凋亡、细胞周期阻滞及抗炎信号通路。

CAS号: 28957-04-2
分子式: C₂₀H₂₈O₆
分子量: 364.43 g/mol
推荐储存条件: -20 °C，避光防潮保存
溶解度（DMSO）: 可溶；建议以DMSO配制≥10 mM储备液作为起始浓度（需实验验证）
货号: O111381

所需材料与试剂

实验开始前，请确认以下材料已备齐：

Oridonin（Aladdin Scientific，货号O111381）——使用前于−20 °C保存
无水DMSO（细胞培养级，纯度≥99.9%）
磷酸盐缓冲液（PBS，无菌，pH 7.4）
适合所用细胞系的完全细胞培养基
0.22 µm针头式过滤器（若需对水相稀释液进行无菌过滤）
微量离心管（1.5 mL，建议使用低蛋白结合型）
分析天平及经校准的移液器
个人防护装备：丁腈手套、实验服及护目镜

注意：含DMSO的溶液不得通过标准醋酸纤维素滤膜过滤，应使用PVDF或PTFE膜。

储备液配制

按照以下步骤配制Oridonin储备液：

恢复至室温：从−20 °C取出样品瓶，在开盖前先在室温下平衡（约15–20分钟），以防止水汽凝结接触粉末。
计算所需体积：使用公式V（mL）= 质量（mg）÷ [分子量（g/mol）× 目标浓度（mM）× 10⁻³]。例如，用5 mg Oridonin（MW = 364.43 g/mol）配制10 mM储备液：V = 5 ÷（364.43 × 10 × 10⁻³）≈ 1.37 mL DMSO。
溶解：将计算所得体积的无水DMSO直接加入样品瓶，或将粉末转移至低蛋白结合型微量离心管后加入溶剂。涡旋振荡30–60秒，若仍有颗粒未溶，可在超声水浴中短暂超声（30秒）。
检查澄清度：目视检查溶液，应为澄清、无色至淡黄色液体。溶液浑浊时请勿继续使用。
分装与储存：分装为单次用量的小份，避免反复冻融。若需长期保存，可在惰性气体（氩气或氮气）保护下密封。于−20 °C保存，6个月内使用完毕。避免反复冻融（冻融次数不超过3次）。

审核标注：具体溶解度数值（mg/mL或mM）应以O111381批次质检报告为准，并在本实验室条件下进行实验验证。

工作液配制与细胞处理

从DMSO储备液稀释配制工作浓度时，需注意保持化合物溶解性并将DMSO细胞毒性降至最低：

预热培养基：使用前将完全培养基预热至37 °C。
中间稀释（可选）：对于极低终浓度，可在连续轻柔涡旋的同时，将储备液逐滴加入温热的PBS或无血清培养基中，制备中间水相稀释液，以降低沉淀风险。
终稀释：将所需体积的储备液（或中间稀释液）加入完全培养基中，配制所需终浓度。培养体系中DMSO终浓度不应超过0.1%（v/v），以避免溶剂相关细胞毒性。务必设置溶媒对照（等量DMSO、不含化合物）。
典型浓度范围：已发表的Oridonin细胞实验文献通常采用低至中微摩尔浓度范围；但具体范围因细胞系和检测终点而异，须通过剂量-响应实验实验确定。
处理细胞：移去原有培养基，加入预热的工作液，于37 °C、5% CO₂湿润培养箱中孵育所需时间。同时设置适当的阳性对照和阴性对照。

审核标注：本方案未引用特定细胞系的IC₅₀数值；研究人员应独立开展剂量-响应实验，并参阅相关原始文献中针对其特定模型的数据。

下游检测指导

Oridonin已被用于多种细胞及分子检测实验，以下为通用指导建议：

细胞活力/细胞毒性检测

MTT法、CCK-8法或CellTiter-Glo®发光法均与Oridonin处理条件相兼容。至少设置6个浓度梯度点及溶媒对照，以绘制完整的剂量-响应曲线。建议在24 h、48 h和72 h分别检测，以捕捉时间依赖性效应。

细胞凋亡检测

流式细胞术Annexin V/PI双染色法常用于定量Oridonin处理后的早期和晚期凋亡。收集时应同时收取悬浮细胞和贴壁细胞，以避免低估凋亡细胞比例。可通过Western blotting检测裂解的Caspase-3、Caspase-9和PARP，以佐证流式数据。

Western Blotting

使用含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA或改良裂解缓冲液裂解细胞。每泳道蛋白上样量通常为20–40 µg。Oridonin相关研究中常检测的靶点包括NF-κB信号通路组分、Bcl-2家族蛋白及MAPK级联成员——请根据具体研究问题确认抗体选择。

对照设置与重复实验

所有实验均应设置：（1）未处理细胞组，（2）溶媒（DMSO）对照组，（3）适用时设阳性对照化合物组，以及（4）生物学重复（n ≥ 3）。

安全、废弃物处置与故障排查

安全注意事项：Oridonin为仅供实验室使用的研究试剂。操作时须佩戴丁腈手套、穿戴实验服并使用护目镜。避免吸入粉尘。使用前请阅读Oridonin O111381的安全数据表（SDS）。

废弃物处置：含Oridonin的溶液及受污染材料应按照所在机构的化学废弃物法规进行处置。DMSO溶液易渗透皮肤并携带溶解的化合物，操作时请格外谨慎。

故障排查：

问题	可能原因	建议措施
工作液中出现沉淀	超过水相溶解度上限或温度过低	降低化合物浓度；预热培养基；若与实验相容，可使用PEG-400等助溶剂
未观察到生物学效应	浓度过低；化合物降解；细胞系耐药	重新核对储备液浓度；通过HPLC验证化合物完整性；提高给药剂量；确认所用细胞系的敏感性
溶媒对照DMSO细胞毒性偏高	DMSO浓度>0.1%	配制更高浓度的储备液，以减少所需DMSO用量
重复实验结果不一致	混合不充分；反复冻融导致降解	每次使用前充分涡旋；使用新鲜的单次分装液

常见问题

配制Oridonin储备液的最佳溶剂是什么？

无水细胞培养级DMSO是配制Oridonin储备液最常用的溶剂。对于大多数细胞实验，以DMSO配制10 mM储备液是实用的起始浓度。使用前应立即将DMSO储备液稀释至水相培养基中，并确保终培养体系中DMSO浓度不超过0.1%（v/v）。

如何储存Oridonin（O111381）以保持其稳定性？

Oridonin粉末应密封保存于−20 °C，避光防潮。DMSO储备液同样应在−20 °C下以单次用量分装保存，避免反复冻融加速降解。若材料已存放较长时间，建议通过HPLC验证其稳定性。

Oridonin细胞实验中应使用何种溶媒对照？

务必设置溶媒对照，其DMSO用量应与最高化合物浓度孔所用DMSO体积相同（不含Oridonin）。所有实验组的DMSO终浓度应保持一致，且不应超过0.1%（v/v），以确保观察到的效应归因于Oridonin而非溶剂。

Oridonin能否不用DMSO直接溶于水性缓冲液？

Oridonin水溶性有限，通常需要DMSO等有机溶剂进行初始溶解。不建议直接溶于PBS或细胞培养基，因可能导致溶解不完全及沉淀，从而造成给药剂量不准确。若需避免使用DMSO，可参阅文献了解环糊精包合等替代增溶策略，并在使用前实验验证溶解性。

Oridonin是否适用于体内动物实验？本方案是否涵盖相关应用？

本方案专为体外细胞实验及生化检测设计。Oridonin的体内给药配方涉及更多考量，如溶媒选择（例如PEG-400/生理盐水混合液或纳米粒包封）、给药途径及药代动力学分析，超出本文档范围。计划开展体内实验的研究人员应参阅相关原始文献及所在机构的动物实验管理规定。

参考文献

Ikezoe T et al. Oridonin induces growth inhibition and apoptosis of a variety of human cancer cells. Int J Oncol. 2003. (General reference for Oridonin biological activity — specific volume/page requires verification.)
Liu J et al. Oridonin: A review of its pharmacology, pharmacokinetics and toxicity. Cell Prolif. 2021. (Comprehensive review — citation details require verification.)
Aladdin Scientific. Certificate of Analysis, Oridonin, SKU O111381. (Lot-specific data; consult current CoA for confirmed purity and physical data.)

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录：实验方案（Protocols）

探索主题：天然产物细胞凋亡细胞活力检测二萜类化合物实验方案 Oridonin

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。