简介
         PEG 酸是一类一端含有羧酸基团，另一端含有羟基、叠氮基、氨基、马来酰亚胺或三键的 PEG 化合物。这些试剂具有确定的分子量和间隔长度，可用于修饰蛋白质或含有胺基团的表面，如量子点、自组装单层和磁性颗粒。用 PEG 间距物对固体表面进行功能化可显著减少蛋白质的非特异性结合。

条件：1 a) EDC、NHS、DMF 或 DCM，b) R-NH2 1 a) EDC、NHS、DMF 或 DCM；b) R-NH2
条件：2 a) 0.5mM MES 缓冲液，pH4.5，EDC，NHS；b) R-NH2

产品信息

    注：收到后请在 -20°C 干燥保存。
         • 大多数 PEG 酸试剂为低熔点固体，难以称重和分装。为便于操作，可将试剂溶于二甲基亚砜 (DMSO) 或二甲基甲酰胺 (DMF) 中，制成储备溶液。
         • 将未使用的储备溶液储存在 -20°C 下。打开试剂瓶前先将其平衡至室温，以避免水分凝结。为尽量减少与空气的接触，请将原液置于氩气或氮气等惰性气体中。用隔膜盖住储备溶液，用注射器取出溶液。
         • 如果 PEG 酸用于表面结合和进一步负载蛋白质，则反应中试剂与表面的比例会影响可用于进一步修饰的羧酸残基的数量。优化这些比率可获得特定应用所需的修饰水平。
         • 使用 pH 值为 7-9 的不含胺缓冲液，如 PBS（20mM 磷酸钠，150mM NaCl；pH 值为 7.4）；100mM 碳酸/碳酸氢盐；或 50mM 硼酸盐。请勿使用含有伯胺的缓冲液，如三羟甲基丙烷或甘氨酸，它们会与酰化发生竞争。

所需其他材料
         •  水溶性有机溶剂（分子筛处理过），如 DMSO 或 DMF
         •  小容量、无穴注射器，用于分装试剂储备溶液，同时尽量减少与空气的接触
         •  PBS 缓冲液 磷酸盐缓冲盐水、PBS（20mM 磷酸钠、0.15MNaCl；pH 7.2）或其他非胺、无孤对硫缓冲液
         •  MES 缓冲液： MES 缓冲盐水（0.1M MES，0.5M NaCl；pH 6.0 或 0.1M MES，0.9% NaCl；pH 4.7）
         •  EDC.HCl
         •  NHS
         •  羟胺盐酸盐 

I. 步骤（有机溶剂法）
         将 PEG 酸（1 毫摩尔）溶解到干 DCM（1.5 毫升）中。依次加入用 0.5 mL 干燥 DCM 溶解的 EDC-HCl'（2.0 mmol）和用 10 μL DMSO 溶解的 NHS（2.0 mmol）。溶液在室温下搅拌 30 分钟，然后将 NH2-R'（1.5 mmol）溶解到溶液中。加入 DIPEA（1.5mmol），混合物在室温下搅拌 1 小时。

程序（水溶液法）

         1. 开瓶前将 PEG 酸试剂平衡至室温。
         2. 将每种试剂 100 毫克溶解于所需量的 DMF 或 DMSO 中，制备储备溶液。按照 “重要产品信息 ”部分的指示，盖好瓶盖，储存和处理储备溶液。
         3. 在 PBS 缓冲液中配制适量的表面或蛋白质。
         4 . 在少量缓冲液 B 中加入适量的 EDC 和 NHS 至修饰表面，并在室温下反应 15 分钟，即可激活 PEG 连接器上的羧酸基团。为获得最佳效果，请在 pH 值为 5-6 时进行此反应。
注意：EDC 和 NHS 的活化反应在 pH 值为 4.5-7.2 时最有效；但 NHS 活化分子与伯胺的反应在 pH 值为 7-8 时最有效。
         5. 将在 PBS 缓冲液中制备的所需含胺底物加入活化表面，并在室温下反应 2 小时。为获得最佳效果，请在加入含胺底物前立即用 PBS 缓冲液将反应溶液的 pH 值调至 7.2-7.5。
         6. 为了淬灭共轭反应，可加入羟胺或另一种含胺缓冲液。羟胺可水解未反应的 NHS。其他淬灭化合物包括 Tris、赖氨酸、甘氨酸或乙醇胺；但这些含伯胺的化合物会修饰羧酸。

参考文献​

1. Prime, K.L. and Whitesides, G.M. (1991). Self-assembled organic monolayers: model systems for studying absorption of proteins at surfaces. Science 252:1164.

2. Bentzen, E.L., et al. (2005). Surface modification to reduce non-specific binding of quantum dots in live cell assays.Bioconjugate Chem 16:1488-94.

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4. Zheng, M., et al. (2003). Ethylene glycol monolayer protected nanoparticles for eliminating nonspecific binding with biological molecules. J Am Chem Soc 125:7790-1.

5. Verma, A. and Rotello, V.M. (2005). Surface recognition of biomacromolecules using nanoparticle receptors. ChemCommun 3:303-12.

6. Kidambi, S., et al. (2004). Selective depositions on polyelectrolyte multilayers: self-assembled monolayers of m dPEG acid as molecular template. J Am Chem Soc 126:4697-03.  

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