简介
        SPDP-PEG 交联剂可通过胺-胺或胺-巯基交联实现蛋白质共轭。聚乙二醇（PEG）间隔臂在反应介质中具有极高的溶解度。SPDP-PEG 交联剂最好先溶解在有机溶剂中制成储备溶液，然后再加入反应混合物中，SPDP 试剂会产生含二硫化物的连接。

        SPDP 试剂的胺反应部分是 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯。通过 NHS 酯进行的共轭反应通常在 pH 值为 7-8 的磷酸盐、碳酸盐/碳酸氢盐或硼酸盐缓冲液中进行。

        SPDP 试剂的巯基反应部分是 2-吡啶二硫基，在 pH 值为 7-8 的无硫醇缓冲液中反应效果最佳。可通过测量 343nm 波长处的吸光度来确定反应结果中吡啶-2-硫酮的位移。

        生成的交联含有二硫化物，可用二硫苏糖醇（DTT）或 THPP 或 TCEP 还原裂解。在大多数情况下，使用 SPDP 试剂产生的交联可以用 pH 值为 4.5 的 25mM DTT 来裂解，而不会降低原生蛋白质的二硫键。

        使用 SPDP 试剂进行的交联实验并不局限于涉及蛋白质的实验。任何带有伯胺和巯基的分子都可以使用 SPDP 试剂进行修饰或交联。

处理和储存信息
       • 收到产品后，请存放在 -20°C 下，防止受潮。
       • 产品在环境温度下装入装有干燥剂的密封袋中运输。此外，瓶子还用实验室薄膜包裹，以防止产品受潮并保持产品的完整性。

蛋白 A 与蛋白 B 通过 SPDP-PEG 连接的步骤
        1. 将 5 毫克 SPDP-PEG 溶于 640 微升 DMSO 或 DMF 中，得到 25 毫摩尔的储备溶液。
        2. 将浓度为 1-5 mg/mL 的含胺蛋白 A 溶解在 100 mM 磷酸钠缓冲液（pH 值为 7.2 至 8.0，1 mM EDTA）中。
        3. 在 1 mL 上述蛋白 A 溶液中加入 20 µL 25 mM SPDP-PEG 溶液。
        4. 室温下反应 30-60 分钟。
        5. 通过凝胶过滤从含有蛋白质的溶液中去除未反应的 SPDP 交联剂。
        6. 将含硫醇的蛋白质 B 溶解在缓冲液（100 mM 磷酸钠，pH 7.2 至 8.0，1 mM EDTA）中。
        7. 将 0.2 至 1.0 摩尔当量的蛋白 B 溶液加入脱盐的活化蛋白 A 中。

        8. 让反应在室温下进行 8 到 16 小时 9.
        9. 如有需要，可进一步纯化共轭物。

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