简介 
         硫醇聚乙二醇（PEG）是一种含硫醇的聚乙二醇（PEG）端试剂，另一端带有甲基醚、羟基或羧基。这些试剂具有确定的分子量和间隔长度，可用于修饰量子点、自组装单层和磁性颗粒等表面。在应用中，用 PEG 间隔物对固体表面进行功能化可显著减少非特异性蛋白质结合。

         • Thiol PEG 试剂为低熔点固体或液体，难以称量和分装。为便于操作，可将试剂溶于二甲基亚砜 (DMSO) 或二甲基甲酰胺 (DMF) 中，制成储备溶液。
         • 将未使用的储备溶液储存在 -20°C 下。打开试剂瓶前先将其平衡至室温，以避免水分凝结。为尽量减少与空气的接触，请将原液置于氩气或氮气等惰性气体中。用隔膜盖住储备溶液，用注射器取出溶液。
         • 如果羧基硫醇 PEG 试剂用于表面结合和进一步负载蛋白质，反应中试剂与表面的比率会影响可用于进一步修饰的羧酸残基的数量。优化这些比率可获得特定应用所需的修饰水平。
         • 使用 pH 值为 7-9 的不含胺缓冲液，如 PBS（20mM 磷酸钠，150mM NaCl；pH 值为 7.4）；100mM 碳酸/碳酸氢盐；或 50mM 硼酸盐。请勿使用含有伯胺的缓冲液，如 Tris 或甘氨酸，它们会与酰化发生竞争。

图 1. 用 PEG 和抗体（作为钝化剂）修饰 NP 的方案。

应用
金纳米颗粒的合成
         在一个装有搅拌棒的三颈圆底烧瓶中，将 1.4 mL 柠檬酸三钠（0.15 M）注入 50 mL 沸腾的 pH 值为 7 的四氯金酸钾水溶液（3 mM）中。溶液回流 5 分钟后淬火至室温。用配备了六硼化镧 (LaB6) 晶体的飞利浦 CM20-UltraTWIN 透射电子显微镜 (TEM)，在 200 kV 的加速电压下获得了 GNP 的图像。通过测量 100 多个 GNP 的尺寸，确定了平均尺寸和标准偏差。GNP 的浓度是通过紫外可见吸收光谱测定的，使用的消光系数是在假设合成过程中加入的所有金离子都已还原成纳米粒子（剩余的金盐低于 ICP 的检测限）并了解 GNPs 尺寸的情况下计算得出的。例如，对于 16 nm 的 GNP，估计溶液中的 GNP 浓度约为 23 nM，消光系数为 4.3x 108 M-1 cm-1。

GNP 功能化

        注：其他硫醇-PEG-X（X：COOH、NH2、炔烃、OMe 等）也可用于此应用。

         将过量的 HS-PEG 添加到柠檬酸盐封端的 GNPs 水悬浮液（>3 x104 HS-PEGs/GNP）中，然后将所得悬浮液搅拌过夜。随后通过离心（18 分钟，17,000g）清洗颗粒，并用等体积的水取代上清液。这一过程共进行了 6 次，相当于将可溶性物质（主要是 HS-PEGs 和柠檬酸盐）稀释了 5 x 106 倍。

共轭 

        注：以下步骤针对的是羧基-PEG-SH 修饰的纳米粒子，对于其他官能团修饰的纳米粒子，请查阅其应用说明。

         1. 在 MES 缓冲盐水（0.1M MES，0.5M NaCl；pH 6.0 或 0.1M MES，0.9% NaCl；pH 4.7）中加入适量的 EDC 和 NHS，在室温下反应 15 分钟，即可激活新引入的羧酸基团。
         2. 用 MES 缓冲生理盐水清洗表面，去除残留的 EDC 和 NHS。
         3. 将所需的含胺底物（在 PBS 缓冲液中制备）加入活化表面，并在室温下反应 2 小时。
         4. 加入羟胺或另一种含胺缓冲液以淬灭共轭反应。

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