外周血是我们流式实验中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固，采集外周血样本时，需要使用带抗凝剂的采血管，或采集后立即加入抗凝剂。通常，我们流式实验中用到的抗凝剂有两种：EDTA和肝素。

1，两种抗凝剂的抗凝原理

EDTA（乙二胺四乙酸）：

        EDTA能与血液中的Ca2＋螯合，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。常用的是钠盐或钾盐。

肝素：

        加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶的作用，阻止凝血酶的形成和血小板的聚集，从而阻止血液凝固。

2，两种抗凝剂的特点

EDTA

        钾盐在血液中的溶解性更好，因而使用较多，尤其是二钾盐——EDTA-K2可以通过喷雾干燥法附着在采血管的内表面，不会对采集的血液样品产生稀释。

        EDTA对血细胞形态的影响比较小，有较好的稳定性，但EDTA会抑制或干扰纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能的检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。

肝素

        肝素螯合力低，对水分子运动的影响小，对血液成分的干扰少，不影响红细胞体积，不引起溶血，可谓优点众多。但肝素也有两个明显缺点：

       ● 肝素主要从猪牛羊等动物组织中分离得到，相比其他抗凝剂的成本更高；

       ● 肝素只能延缓凝血过程而不能阻止凝血。实际使用中发现，使用肝素钠作为抗凝剂的全血，在常温10~12小时，会逐渐出现凝血结块的现象。

3，EDTA or 肝素

        由于两种抗凝剂会对血液产生不同的干扰，我们通常会根据实验目的来选择合适的抗凝剂。

        a，若样本直接裂解红细胞，进行表面指标染色实验，则两种抗凝剂都可使用；

        b，因为肝素会对血小板产生影响，所有血小板相关实验不建议使用肝素；

        c，如果是采血后检测细胞因子，则不建议使用EDTA抗凝。

        使用两种抗凝剂抗凝后，检测细胞因子，EDTA抗凝样本的IFN-γ表达量明显低于肝素抗凝样本。

        由于EDTA能与Ca2＋螯合，导致细胞因子刺激剂——离子霉素（Ionomycin）转运的Ca2＋减少，而Ca2＋又是细胞因子分泌必不可少的物质，因此，进行细胞因子检测，建议使用肝素抗凝。

        不论使用哪种抗凝剂，采血后一定要让抗凝剂与血液充分混合，才能达到抗凝的效果。

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