PON3 小鼠单克隆抗体操作规程：应用与使用指南
PON3 小鼠单克隆抗体操作规程：应用与使用指南
PON3 Mouse mAb是一种以人PON3（对氧磷酶3）为靶标、在小鼠中制备的单克隆抗体，以PBS为溶剂保存，已通过验证可用于PON3蛋白的免疫学检测研究。
- 产品名称
- PON3鼠单克隆抗体
- 货号
- Ab350645
- 宿主物种
- 小鼠
- 抗体类型
- 单克隆抗体
- 制剂
- 磷酸盐缓冲液（PBS）
- 靶蛋白
- PON3（对氧磷酶3）
- 参考来源
- absea #KC-28343
PON3及单克隆抗体概述
对氧磷酶3（PON3）是对氧磷酶家族成员之一，该家族还包括PON1和PON2。PON3是一种钙依赖性内酯酶，主要与高密度脂蛋白（HDL）相关，在抗氧化防御和脂质代谢中发挥重要作用。PON3的失调与心血管疾病、氧化应激及代谢紊乱密切相关。
PON3鼠单克隆抗体（Ab350645）是在小鼠体内产生的、特异性靶向PON3的单克隆抗体，以PBS为溶剂保存，不含额外防腐剂或载体蛋白，适用于多种下游免疫学应用。本产品对应absea #KC-28343。
推荐使用方案
样品制备：使用含蛋白酶抑制剂的适当裂解缓冲液制备细胞裂解物或组织匀浆。使用前通过标准方法（如BCA法或Bradford法）测定蛋白浓度。
蛋白质印迹（WB）：
- 通过SDS-PAGE分离蛋白样品，并转膜至PVDF或硝酸纤维素膜。
- 用含5%脱脂奶粉或BSA的TBST在室温下封闭1小时。
- 按推荐工作稀释度（具体稀释范围请参见产品说明书）加入PON3鼠单克隆抗体，4°C孵育过夜。
- 用TBST洗膜三次（每次5分钟）。
- 室温下用适当的辣根过氧化物酶（HRP）偶联抗鼠二抗孵育1小时。
- 用TBST洗膜三次，再用化学发光底物检测信号。
酶联免疫吸附测定（ELISA）：
- 以1–4 µg/mL浓度将抗原溶于碳酸盐-碳酸氢盐包被缓冲液，4°C过夜包被ELISA板孔。
- 用含1% BSA的PBS在室温下封闭1–2小时。
- 按适当稀释度加入PON3鼠单克隆抗体，室温孵育1–2小时。
- 洗板后加入HRP偶联抗鼠二抗，孵育1小时。
- 用TMB底物显色，加终止液后在450 nm处读取吸光度。
注意：最佳工作稀释度应针对每种应用和实验体系进行经验性优化。请参阅产品说明书以获取经验证的使用条件。
储存与使用注意事项
PON3鼠单克隆抗体（Ab350645）以纯PBS为溶剂保存。为确保抗体的最佳性能，请遵循以下储存和使用注意事项：
- 短期储存（不超过1个月）：于4°C保存。
- 长期储存：将抗体分装以避免反复冻融，于−20°C或以下保存。如产品中不含BSA，可加入终浓度0.1%的BSA以辅助长期稳定。
- 避免：反复冻融、直接光照及污染。
- 开瓶前短暂离心，使内容物集中于管底。
- 实验使用期间置于冰上保存。
注意：制造商产品说明书中的具体储存建议具有优先效力，请始终参阅产品附件获取最新指导。
故障排除
若使用PON3鼠单克隆抗体时出现意外结果，请参考以下故障排除步骤：
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 未检测到信号 | 抗体浓度过低；样品中靶抗原未表达 | 提高抗体浓度；验证所用细胞/组织模型中PON3的表达情况；使用阳性对照裂解液 |
| 背景过高 | 封闭不充分；抗体浓度过高 | 延长封闭时间；降低一抗浓度；提高洗涤强度 |
| 非特异性条带（WB） | 交叉反应；样品降解 | 优化抗体稀释度；使用含蛋白酶抑制剂的新鲜样品；必要时加入还原剂 |
| 信号弱 | 洗涤过度；转膜效率低 | 缩短洗涤时间；使用预染蛋白Marker或丽春红S染色验证转膜效果 |
常见问题
PON3鼠单克隆抗体（Ab350645）的制剂组成是什么？
PON3鼠单克隆抗体（Ab350645）仅以PBS为溶剂保存，不含额外的稳定剂、防腐剂或载体蛋白。需要长期储存的研究人员可考虑添加BSA或甘油进行稳定，但应验证所添加的物质不会干扰下游实验。
PON3鼠单克隆抗体已经过哪些应用的验证？
根据现有产品信息，PON3鼠单克隆抗体适用于PON3的免疫学检测。此类鼠单克隆抗体的常见应用包括蛋白质印迹（WB）和酶联免疫吸附测定（ELISA）。研究人员应查阅官方产品说明书，以获取完整且经验证的应用列表及对应稀释范围。
如何储存PON3鼠单克隆抗体以保持其活性？
短期使用（不超过1个月）时，于4°C保存。长期储存时，将抗体分装为单次用量，于−20°C或以下保存，以避免反复冻融导致抗体性能下降。储存时应避免直接光照及污染。
PON3是什么？为什么它是重要的研究靶标？
PON3（对氧磷酶3）是一种与HDL颗粒相关的钙依赖性内酯酶，在氧化应激和脂质过氧化的保护机制中发挥重要作用。其在心血管疾病、代谢综合征及抗氧化防御机制研究领域具有重要价值。PON3特异性抗体可实现对生物样品中该酶的精准检测与定量分析。
使用PON3鼠单克隆抗体进行实验时，是否有推荐的阳性对照？
已知表达PON3的细胞系或组织（如肝脏细胞系）通常用作PON3抗体验证的阳性对照。研究人员在实验前应确认其特定模型体系中PON3的表达水平。如有需要，请查阅产品说明书获取制造商推荐的对照信息。
参考文献
- absea KC-28343 product reference. Absea Biotechnology Ltd. PON3 Monoclonal Antibody.
- Draganov DI, Teiber JF, Speelman A, Osawa Y, Sunahara R, La Du BN. Human paraoxonases (PON1, PON2, and PON3) are lactonases with overlapping and distinct substrate specificities. J Lipid Res. 2005;46(6):1239-1247. doi:10.1194/jlr.M400511-JLR200
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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