实验方案（Protocols）

PPP3R1 小鼠单克隆抗体：操作规程与应用指南

· · 发布于 2026年10月6日 · 更新于 2026年10月6日 ·

PPP3R1 Mouse mAb是一种针对钙调磷酸酶调节亚基B（PPP3R1）的高特异性单克隆抗体，已验证可用于免疫学及细胞信号转导研究，适用于蛋白质印迹、免疫组织化学及免疫荧光等多种实验应用。

产品货号: Ab349215
抗体类型: 小鼠单克隆抗体（mAb）
靶蛋白: PPP3R1（钙调磷酸酶调节亚基B，亚型1）
宿主物种: 小鼠
推荐应用: 蛋白质印迹（WB）、免疫组织化学（IHC）、免疫荧光（IF）
储存条件: 于-20°C保存，避免反复冻融

PPP3R1及抗体背景概述

PPP3R1基因编码钙调磷酸酶的调节亚基B（又称钙调磷酸酶B，1型），钙调磷酸酶是一种依赖钙离子和钙调蛋白的丝氨酸-苏氨酸磷酸酶。钙调磷酸酶由催化亚基A（PPP3CA、PPP3CB或PPP3CC）和调节亚基B（PPP3R1或PPP3R2）组成异二聚体。调节亚基B是一种含EF手型结构域的钙结合蛋白，对磷酸酶活性不可或缺，并在钙依赖性信号转导通路中发挥关键作用，包括通过NFAT转录因子家族介导的T细胞活化。

PPP3R1 Mouse mAb（Ab349215）采用标准杂交瘤技术生产，可高特异性检测多种实验体系中的内源性PPP3R1蛋白。该抗体是研究免疫信号、神经元功能、心脏肥大及其他钙调磷酸酶介导过程的重要工具。

样品制备方案

细胞裂解液（用于蛋白质印迹）：

用冰预冷的磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）洗涤细胞两次。
用含蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液[50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脱氧胆酸钠、0.1% SDS]裂解细胞。
在冰上孵育30分钟，期间间歇涡旋混匀。
在4°C下以12,000 × g离心15分钟，收集上清液。
使用BCA法或Bradford法定量蛋白浓度。
将样品在Laemmli上样缓冲液中制备，上样前在95°C煮沸5分钟。

组织切片（用于IHC/IF）：

将组织在10%中性缓冲甲醛中固定24小时，随后进行石蜡包埋（FFPE）处理，或使用新鲜冰冻切片。
对于FFPE切片：使用柠檬酸缓冲液（10 mM柠檬酸钠，pH 6.0）在95–100°C进行热诱导抗原修复（HIER）20分钟。
用甲醇中3% H₂O₂封闭内源性过氧化物酶（用于IHC），孵育10分钟。
在含0.1% Tween-20的PBS（PBS-T）中用5%正常血清（与二抗宿主物种匹配）室温封闭非特异性结合1小时。

抗体孵育与检测方案

蛋白质印迹（WB）：

将20–40 µg总蛋白通过适当浓度的SDS-PAGE凝胶进行分离（检测PPP3R1推荐使用12%凝胶，预期分子量约19 kDa）。
将蛋白质转移至PVDF膜或硝酸纤维素膜。
用含5%脱脂奶粉的TBST（20 mM Tris、150 mM NaCl、0.1% Tween-20，pH 7.6）在室温封闭1小时。
按照厂商推荐稀释比例（参见产品说明书，通常为1:500–1:2000）将PPP3R1 Mouse mAb（Ab349215）与膜在4°C轻柔振荡孵育过夜。
用TBST洗膜3次，每次10分钟。
室温下与适当的HRP标记抗小鼠二抗孵育1小时。
用TBST洗膜3次，每次10分钟。
使用ECL化学发光底物检测信号，在X光胶片或数字成像系统上成像。

免疫组织化学（IHC）：

封闭后，将切片在湿盒中与PPP3R1 Mouse mAb（Ab349215）按推荐稀释比例在4°C孵育过夜。
用PBS-T洗涤3次。
使用适当的生物素化二抗或聚合物检测系统。
用DAB（3,3′-二氨基联苯胺）底物显色，苏木精复染。
脱水、透明后用永久性封片剂封片。

免疫荧光（IF）：

封闭后，室温孵育细胞或切片1小时或在4°C孵育过夜，使用推荐稀释比例的PPP3R1 Mouse mAb。
用PBS-T洗涤3次。
避光条件下室温与荧光素标记的抗小鼠二抗孵育1小时。
用DAPI（0.1–1 µg/mL）复染细胞核5–10分钟。
洗涤后用水性封片剂封片，通过荧光显微镜或共聚焦显微镜成像。

故障排查指南

问题	可能原因	建议解决方案
蛋白质印迹无信号	抗体稀释倍数过高；蛋白上样量不足；转膜失败	优化稀释比例；上样30–50 µg蛋白；用丽春红S染色验证转膜效果
背景过高	封闭不充分；二抗交叉反应；洗涤不充分	将封闭时间延长至2小时；检测磷酸化靶点时用5% BSA代替脱脂奶粉；增加洗涤步骤
多条非特异性条带	蛋白降解；曝光过度	在裂解液中加入新鲜蛋白酶抑制剂；缩短ECL曝光时间
IHC信号弱	过度固定；抗原修复不充分；抗体稀释倍数过高	优化固定时间；延长HIER步骤；向下滴定抗体浓度
IF背景高	封闭不充分；二抗非特异性结合	将封闭血清浓度提高至10%；检测胞内抗原时加入0.1% Triton X-100进行通透处理

储存、操作与质量保证

储存条件：PPP3R1 Mouse mAb（Ab349215）到货后应在-20°C保存。短期使用（不超过1个月）时，可在4°C保存。应避免反复冻融，因为这可能影响抗体完整性并降低结合活性。强烈建议首次使用时进行分装。

操作注意事项：打开前短暂离心小瓶，确保所有液体沉于管底。稀释时应在冰上操作。请勿使用长时间置于室温或出现浑浊的抗体。

质量控制：每批次PPP3R1 Mouse mAb均经过质量控制检测，以确认特异性和反应性。每次发货均附有批次专属数据。研究人员应始终参考最新产品说明书获取最新稀释建议和已验证应用，因为这些信息可能因批次不同而有所差异。

常见问题

该抗体检测到的PPP3R1预期分子量是多少？

PPP3R1（钙调磷酸酶调节亚基B，亚型1）的预测分子量约为19 kDa。在蛋白质印迹中，条带应出现在该分子量附近，但翻译后修饰有时可能导致表观分子量略有偏移。

PPP3R1 Mouse mAb（Ab349215）与哪些物种存在交叉反应？

具体交叉反应数据请参阅Ab349215的产品说明书进行确认。PPP3R1在哺乳动物物种间高度保守，因此针对该蛋白的抗体通常对人、小鼠和大鼠样品具有反应性，但需逐批次验证。

该抗体是否可用于免疫沉淀（IP）或流式细胞术？

Ab349215的来源资料未明确列出免疫沉淀或流式细胞术为已验证应用。有意使用这些应用的研究人员应联系Aladdin Scientific技术支持或自行进行优化实验，并参阅最新产品说明书获取完整的已验证应用列表。

如何确定实验中的最佳抗体稀释比例？

请始终从Ab349215产品说明书推荐的稀释范围开始。若背景过高，应提高稀释倍数（减少抗体用量）；若信号偏弱，应降低稀释倍数（增加抗体用量）。在预实验中进行稀释梯度测试（如1:500、1:1000、1:2000）是确定特定样品类型和检测系统最佳工作浓度的最可靠方法。

使用PPP3R1 Mouse mAb时，推荐使用哪种阳性对照？

已知表达钙调磷酸酶的细胞系或组织，如脑组织、T淋巴细胞或心肌，通常用作PPP3R1检测的阳性对照。请参阅Ab349215说明书，了解批次特定的推荐阳性对照细胞系或组织信息。

参考文献

Klee CB, Ren H, Wang X. Regulation of the calmodulin-stimulated protein phosphatase, calcineurin. J Biol Chem. 1998;273(22):13367-13370.
Crabtree GR, Olson EN. NFAT signaling: choreographing the social lives of cells. Cell. 2002;109(Suppl):S67-79.
Rusnak F, Mertz P. Calcineurin: form and function. Physiol Rev. 2000;80(4):1483-1521.

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

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探索主题：免疫组织化学信号转导蛋白质印迹法小鼠单克隆抗体 PPP3R1 钙调磷酸酶

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。