l过硫酸铜和镨铷滤光片的吸收曲线的测绘，了解分光光度计波长度盘上标度的正确性．2、掌握721分光光度计波长校正方法（镨铷滤光片法）及重复性检查．本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

过硫酸铜和镨铷滤光片吸收曲线的制作和分光光度计721波长的校正实验

原理

镨铷滤光片在可见光区域最大吸收峰为529nm，利用这个特性校正721分光光度计

材料与仪器

硫酸铜标准储存液 血清总蛋白测定液
721分光光度计 镨铷滤光片 坐标纸 烧瓶 吸管

步骤

一、 校正

1. 预热仪器

2. 置波长580nm处，T ％调至最大，用一白纸条观察是否有光强均匀的光斑在吸收池处出现，调节光源灯泡使用其符合要求．

3. 把灵敏度钮置于最低端，波长度盘置529nm处，反复调节透光度和100％直至稳定，将镨铷滤光片插入光路，仔细旋转波长度盘，找到T值最低点，此时波长应为529nm（λm）

4. 计算波长误差：Δλ＝λ－λm

5. 校正：调波长于529nm处，取出镨铷滤光片，调节T值至于100％处，再插入镨铷滤光片，打开盖板，调节波长校正螺丝，使值最低．波长校正步骤反复检查波长误差，直至符合要求。

二、重复性检查

1. 用蒸馏水作空白将波长度盘固定在先690nm，调节透光度为100％．

2. 连续测量五次硫酸铜标准液（31.35mol／L即 2000ug／ml），分别记录

透光度值。

3. 计算：Δl=lmax－lmin。

Lmax. lmin分别为透光度最大值和最小值，一般要求Δl小于0.5％

三、 吸收曲线制作

1. 连续测定五个不同浓度的蛋白标准液，记录其吸光度值．

2. 分别以浓度为横坐标. 吸光度为纵坐标绘制吸收曲线．

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