RAGE Mouse mAb：常见问题、应用及实验方案
RAGE Mouse mAb：常见问题、应用及实验方案
RAGE Mouse mAb是一种针对晚期糖基化终末产物受体（RAGE）的鼠源单克隆抗体，RAGE是一种多配体受体，与炎症、糖尿病并发症、神经退行性疾病及肿瘤研究密切相关。
- 产品货号
- Ab350673
- 抗体类型
- 鼠源单克隆抗体（mAb）
- 制剂
- 仅含PBS（不含载体蛋白，不含叠氮化物）
- 靶标
- RAGE（晚期糖基化终末产物受体）
- 宿主物种
- 小鼠
- 参考编号/交叉参考
- absea#KC-2163
RAGE是什么？为何它是重要的研究靶点？
RAGE（晚期糖基化终末产物受体）是免疫球蛋白超家族中的一种跨膜受体，由AGER基因编码。它能与多种配体结合，包括晚期糖基化终末产物（AGEs）、HMGB1、S100蛋白及淀粉样β肽。配体与RAGE结合后，可激活下游信号通路——尤其是NF-κB通路——从而驱动促炎基因的表达。
RAGE与多种疾病密切相关，包括糖尿病血管并发症、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、脓毒症及肿瘤进展。在病理条件下，RAGE在内皮细胞、平滑肌细胞、神经元和免疫细胞上的表达显著上调，使其成为重要的生物标志物和治疗靶点。研究人员使用经验证的抗RAGE抗体（如RAGE Mouse mAb，货号Ab350673）在细胞和组织模型中检测、定位和定量RAGE的表达。
推荐应用及建议工作稀释比例
RAGE Mouse mAb（Ab350673）适用于标准免疫检测应用。此类抗RAGE单克隆抗体的典型应用包括：
- 蛋白质免疫印迹（WB）：在变性条件下检测细胞或组织裂解液中的RAGE蛋白。建议针对各实验室特定裂解液和检测系统优化一抗稀释比例。
- 免疫组织化学（IHC）：在福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）或冰冻组织切片中定位RAGE表达。FFPE切片可能需要进行抗原修复。
- 免疫荧光（IF）：在固定细胞制备物中实现RAGE亚细胞定位的可视化。
- ELISA：可在夹心ELISA格式中作为捕获抗体或检测抗体，用于RAGE的定量检测。
注意：当前来源数据中未详细说明具体验证稀释范围和已确认的反应物种。用户应参阅Ab350673的产品说明书，或联系Aladdin Scientific技术支持获取最新应用说明和滴定建议。
储存、操作及稳定性
RAGE Mouse mAb（Ab350673）以PBS缓冲液（磷酸盐缓冲生理盐水，不含载体蛋白和防腐剂）为溶剂提供。该制剂适用于直接偶联，并避免BSA或叠氮化钠对下游实验的干扰。
PBS制剂单克隆抗体的一般储存指南：
- 长期储存请置于–20 °C。避免反复冻融循环，以防聚集和活性损失。
- 短期使用（不超过1个月）可储存于4 °C。
- 首次解冻后分装为单次使用量，以减少冻融次数。
- 避光保存，防止污染。请勿存放于具有自动除霜功能的无霜冰箱中。
重要提示：请务必以Ab350673官方产品说明书上的储存条件为准，因不同批次可能有特定建议。
使用RAGE Mouse mAb进行蛋白质免疫印迹的基本实验方案
以下是使用RAGE Mouse mAb（Ab350673）进行蛋白质免疫印迹的通用实验方案框架，需根据具体细胞/组织类型和检测系统进行优化。
- 样品制备：使用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞或匀浆组织。测定蛋白质浓度（如BCA法）。每泳道上样20–40 µg总蛋白。
- SDS-PAGE：在适当浓度的聚丙烯酰胺凝胶上分离蛋白质（RAGE约45–50 kDa，通常使用10–12%凝胶）。除非另有说明，在还原条件下电泳。
- 转膜：使用湿转或半干转方式将蛋白质转移至PVDF或硝酸纤维素膜上。
- 封闭：在室温下，用含5%脱脂奶粉或3–5% BSA的TBST封闭膜1小时。
- 一抗孵育：将RAGE Mouse mAb（Ab350673）按产品说明书推荐稀释比例稀释于封闭液中，4 °C孵育过夜或室温孵育1–2小时。
- 洗涤：用TBST洗涤3次，每次10分钟。
- 二抗：按照厂商推荐稀释比例，使用HRP标记的抗鼠IgG二抗，室温孵育1小时。
- 显色：使用ECL底物显色，并通过化学发光检测系统成像。
注意：来源数据中未确认Ab350673的具体稀释比例，请参阅产品说明书或联系Aladdin Scientific技术支持获取相关信息。
RAGE Mouse mAb常见问题排查
以下是使用RAGE Mouse mAb（Ab350673）时的常见问题排查场景：
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 无信号/条带微弱 | 抗体浓度过低；抗原量不足；转膜效率差 | 提高抗体浓度；使用阳性对照裂解液；用丽春红S染色验证转膜效率 |
| 背景偏高 | 封闭不充分；抗体浓度过高；非特异性结合 | 延长封闭时间/提高封闭液浓度；优化抗体稀释比例；增加洗涤强度 |
| 多条非特异性条带 | 蛋白质降解；交叉反应 | 使用含蛋白酶抑制剂的新鲜样品；确认预期分子量（RAGE约45–50 kDa） |
| 储存后活性丧失 | 反复冻融；储存温度不当 | 分装抗体；储存于–20 °C；避免使用无霜冰箱 |
如需针对特定应用的故障排查协助，请联系Aladdin Scientific技术支持。
常见问题
RAGE Mouse mAb（Ab350673）的制剂是什么？
RAGE Mouse mAb（Ab350673）仅以PBS为溶剂，不含BSA等载体蛋白，也不含叠氮化钠等防腐剂。这使其适用于直接标记或偶联应用，避免上述添加剂造成干扰。
RAGE Mouse mAb（Ab350673）能与哪些物种发生反应？
当前来源资料中未明确说明Ab350673已确认的反应物种。请查阅Aladdin Scientific官网提供的官方产品说明书，或联系技术支持以获取经验证的物种反应性数据。
如何储存RAGE Mouse mAb（Ab350673）以保持其活性？
如需长期储存，请将抗体置于–20 °C保存。短期使用时，通常可在4 °C保存不超过一个月。首次解冻后请分装为单次使用量，以避免反复冻融导致的聚集和性能下降。
RAGE Mouse mAb（Ab350673）适用于哪些应用？
RAGE Mouse mAb通常适用于蛋白质免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光和ELISA等免疫学应用。但Ab350673具体经验证的应用需以产品说明书为准，因为并非所有应用均已针对每个抗体批次进行验证。
Ab350673的交叉参考编号是什么？
Ab350673（RAGE Mouse mAb）的交叉参考编号为absea目录号KC-2163。该参考编号可用于从原始供应商处查找更多技术文件或同等产品信息。
该抗体检测到的RAGE预期分子量是多少？
RAGE蛋白（由AGER基因编码）的理论分子量约为42–50 kDa，但由于糖基化修饰，在蛋白质免疫印迹中观察到的条带位置可能略高。请参照已发表文献及产品说明书核实预期条带大小。
参考文献
- Aladdin Scientific. Ab350673 – RAGE Mouse mAb product page. Aladdin Scientific.
- Bierhaus A, Humpert PM, Morcos M, et al. Understanding RAGE, the receptor for advanced glycation end products. J Mol Med. 2005;83(11):876-886.
- Schmidt AM, Yan SD, Yan SF, Stern DM. The biology of the receptor for advanced glycation end products and its ligands. Biochim Biophys Acta. 2000;1498(2-3):99-111.
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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