实验方案（Protocols）

大鼠IgG2c小鼠单克隆抗体（HRP）：操作规程与使用指南

· · 发布于 2026年10月6日 · 更新于 2026年10月6日 ·

Rat IgG2c Mouse mAb (HRP) 是一种偶联辣根过氧化物酶（HRP）的小鼠单克隆抗体，能够特异性识别大鼠IgG2c重链，适用于ELISA和Western blot等免疫检测应用，实现灵敏且特异的大鼠IgG2c检测。

产品名称: Rat IgG2c Mouse mAb (HRP)
货号: Ab350678
偶联标记: 辣根过氧化物酶（HRP）
宿主物种: 小鼠（单克隆）
靶标: 大鼠IgG2c重链
制剂: 仅含PBS（参照供应商编号absea#KH-078）
推荐应用: ELISA、Western blot

产品概述与检测原理

Rat IgG2c Mouse mAb (HRP)（Ab350678）是以大鼠IgG2c为免疫原制备的小鼠单克隆抗体，并直接偶联辣根过氧化物酶（HRP）。作为二抗检测试剂，它能特异性结合大鼠免疫球蛋白的IgG2c亚类，在酶联免疫检测中实现高选择性信号生成。

HRP可催化TMB（3,3′,5,5′-四甲基联苯胺）等显色底物或ECL等化学发光底物的氧化反应，将抗体结合事件转化为可定量的比色或发光信号。单克隆抗体形式确保批次间一致性，并与多克隆抗体相比具有更低的交叉反应性。

本品以纯PBS配制（供应商编号absea#KH-078），与标准免疫检测缓冲液兼容，无需额外脱盐处理。

所需材料

Rat IgG2c Mouse mAb (HRP)——Ab350678（Aladdin Scientific）
适当的封闭液（如含5%脱脂奶粉的TBST，或含1% BSA的PBS）
洗涤缓冲液（PBST：PBS + 0.05% Tween-20，或TBST）
HRP底物：ELISA使用TMB溶液；Western blot使用ECL试剂
酶标仪（TMB法：450 nm检测，620 nm参考波长）或化学发光成像系统
ELISA板或PVDF/硝酸纤维素膜（根据应用选择）
针对目的抗原的一抗（大鼠来源，IgG2c亚类）
大鼠IgG2c同型对照（推荐用于信号验证）

分步操作方案

ELISA

包被：将捕获抗体或抗原吸附于微孔板，4 °C过夜。弃去溶液，拍干。
封闭：加入封闭液（200 µL/孔），室温（RT）孵育1小时。用PBST洗涤3次（200 µL/孔，每次3分钟）。
一抗：将大鼠IgG2c一抗用封闭液稀释后加入，室温孵育1–2小时或4 °C过夜。用PBST洗涤3次。
二抗（Ab350678）：将Rat IgG2c Mouse mAb (HRP)用封闭液稀释（推荐起始稀释比例1:5,000–1:10,000，需根据实际情况优化），每孔加入100 µL，室温孵育1小时。用PBST洗涤5次。
检测：每孔加入100 µL TMB底物，室温避光孵育10–15分钟。加入50 µL 2 N H₂SO₄终止反应。在450 nm（参考波长620 nm）读取吸光度。

Western Blot

转膜：SDS-PAGE电泳后，将蛋白质转移至PVDF或硝酸纤维素膜。
封闭：在封闭液中室温轻柔振荡孵育1小时。
一抗：加入大鼠IgG2c一抗，4 °C孵育过夜。用TBST洗涤3次（每次10分钟）。
二抗（Ab350678）：将Rat IgG2c Mouse mAb (HRP)用封闭液稀释（推荐起始稀释比例1:5,000–1:10,000，需根据实际情况优化），室温孵育1小时。用TBST洗涤3次。
检测：涂布ECL底物，用胶片曝光或化学发光成像系统采集图像。

储存与操作注意事项

请按照产品随附说明书要求储存Rat IgG2c Mouse mAb (HRP)（Ab350678）。以下为PBS配制HRP偶联抗体的通用储存指南：

短期储存（不超过1个月）：置于4 °C保存。避免反复冻融。
长期储存：分装后置于−20 °C保存。若抗体浓度较低，可添加载体蛋白（如0.1% BSA）以防止吸附损失。
注意事项：反复冻融会导致HRP酶活性下降；避免接触叠氮化钠（NaN₃），因其会抑制HRP活性。
避光：HRP偶联物应避免长时间暴露于光照下。

注意：请务必参阅具体批次说明书，以确认储存条件。

常见问题排查

问题现象	可能原因	建议解决方法
无信号	抗体稀释倍数过高；HRP失活；一抗非大鼠IgG2c亚类	对二抗进行梯度稀释优化；检查储存条件；确认一抗亚类
背景过高	封闭不充分；二抗浓度过高；洗涤不充分	优化封闭液种类和封闭时间；降低二抗浓度；增加洗涤次数
信号偏弱	叠氮化物或反复冻融导致HRP部分失活；底物孵育时间过短	使用不含叠氮化钠的缓冲液；减少冻融次数；延长底物孵育时间
非特异条带（WB）	与其他大鼠IgG亚类发生交叉反应；膜干燥	确认亚类特异性；操作过程中保持膜湿润

常见问题

Ab350678检测哪种物种及免疫球蛋白亚类？

Ab350678是一种小鼠单克隆抗体，特异性检测大鼠IgG2c。未经交叉反应验证，它不能可靠检测其他大鼠IgG亚类（如IgG1、IgG2a、IgG2b）或其他物种的免疫球蛋白。

本抗体能否与含叠氮化钠的缓冲液一同使用？

不能。叠氮化钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的强效抑制剂。在需要酶活性的情况下，工作稀释缓冲液和储存缓冲液中均不得含有叠氮化钠。请确保与Ab350678一同使用的所有试剂在检测步骤中不含叠氮化物。

Ab350678的推荐工作稀释比例是多少？

对于ELISA和Western blot应用，HRP偶联二抗的起始稀释比例通常为1:5,000至1:10,000；但最佳稀释比例应根据每个实验体系和抗原浓度进行实验优化。请务必在您的具体检测条件下进行梯度稀释摸索。

如何储存Ab350678以维持HRP活性？

短期使用（不超过一个月）时置于4 °C保存；长期保存时分装成单次用量并置于−20 °C冷冻，以避免反复冻融。产品应避光保存，并远离含叠氮化物的溶液。

Ab350678是否适用于免疫组织化学（IHC）或流式细胞术？

现有产品信息中指定ELISA和Western blot为主要推荐应用。IHC或流式细胞术的适用性尚未在现有产品信息中得到确认，需进行独立验证。请参阅产品说明书或联系Aladdin Scientific技术支持获取指导。

参考文献

Temporarily unavailable — no specific published reference was provided in the source material for Ab350678. Users should consult the product datasheet supplied with each lot.

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录：实验方案（Protocols）

探索主题：二抗蛋白质印迹 ELISA HRP偶联物大鼠IgG2c

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。