重组人CABIN1蛋白:实验方案与使用指南
重组人CABIN1蛋白:实验方案与使用指南
Recombinant Human CABIN1 Protein 是一种研究级试剂,专为支持钙调磷酸酶介导的信号传导、表观遗传调控及免疫细胞活化通路研究而设计。
- 产品名称
- 重组人CABIN1蛋白
- 货号
- rp376563
- 蛋白全称
- 钙调磷酸酶结合蛋白1(CABIN1)
- 物种来源
- 人(智人)
- 应用
- 生化检测、蛋白相互作用研究、表观遗传学及免疫学研究
- 储存建议
- 避免反复冻融;复溶后分装保存
背景:CABIN1蛋白生物学
CABIN1(钙调磷酸酶结合蛋白1),又称Cain,是人类CABIN1基因编码的一种大型支架蛋白。它作为钙调磷酸酶(蛋白磷酸酶2B)的内源性抑制剂发挥作用,而钙调磷酸酶是一种依赖钙/钙调蛋白的丝氨酸-苏氨酸磷酸酶,在T细胞活化及NFAT(活化T细胞核因子)信号通路中居于核心地位。CABIN1通过与钙调磷酸酶结合,抑制其磷酸酶活性,从而调节下游免疫应答。
除在免疫学中的作用外,CABIN1还参与染色质重塑和表观遗传调控。它与Sin3/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)复合物及MBD3/NuRD复合物相互作用,将其与转录抑制和细胞命运决定联系起来。CABIN1还与细胞应激反应和DNA损伤通路有关,使其成为一种具有广泛研究价值的多功能调控蛋白。
复溶与储存方案
正确复溶和储存重组人CABIN1蛋白(rp376563)对于维持蛋白完整性和生物活性至关重要。请严格按照以下步骤操作:
- 离心:收到产品后,将小瓶短暂离心(1,000–2,000 × g,30秒),以收集粘附在瓶盖或瓶壁上的冻干物料。
- 复溶:用无菌超纯水或适当的水性缓冲液(如pH 7.4的PBS)复溶蛋白,以达到所需工作浓度。请参阅随批次提供的质量检验报告(CoA),以获取推荐的复溶体积。
- 温和混匀:切勿涡旋振荡。轻轻吹打或旋转摇匀。如有需要,可在室温下静置5–10分钟以确保完全溶解。
- 分装:立即将复溶后的蛋白分装为单次使用量,以减少冻融循环次数,避免蛋白聚集和活性损失。
- 短期储存:分装后于4 °C保存,可稳定保存最长1周。
- 长期储存:于−80 °C保存分装样品。添加载体蛋白(如0.1% BSA)有助于在长期储存过程中稳定蛋白。
- 避免反复冻融:每次冻融循环均可能降低蛋白质量,请将每份分装样品一次性使用,弃去剩余部分。
注意:货号rp376563的产品说明书及CoA中提供了具体的缓冲液组成、浓度及储存条件,请始终参阅最新的批次专属文件。
实验应用与检测指南
重组人CABIN1蛋白(rp376563)适用于多种体外生化和细胞实验研究应用,包括但不限于:
- 蛋白-蛋白相互作用研究:CABIN1可作为pull-down检测和共免疫沉淀(co-IP)实验中的诱饵蛋白或猎物蛋白,用于绘制其与钙调磷酸酶、HDAC复合物或其他结合伙伴的相互作用图谱。
- 钙调磷酸酶磷酸酶抑制检测:可利用荧光法或比色法磷酸酶活性检测试剂盒,评估CABIN1对钙调磷酸酶磷酸酶活性的抑制能力。
- 结合动力学(SPR/BLI):适用于表面等离子体共振(SPR)或生物层干涉(BLI)检测,以量化与已知相互作用伙伴的结合亲和力和动力学参数。
- ELISA和Western Blot标准品:可作为免疫检测实验中的阳性对照或标准品。
- 表观遗传复合物重建:适用于在体外重建含CABIN1的染色质重塑复合物,以进行生化表征。
请针对每种具体检测格式经验性优化蛋白浓度。请参阅产品说明书,了解该批次的已验证应用数据。
质量控制与操作注意事项
Aladdin Scientific的重组人CABIN1蛋白(rp376563)在出厂前经过质量控制检测。研究人员应遵守以下注意事项以保持产品质量:
- 纯度验证:CoA中提供SDS-PAGE或HPLC纯度数据。使用前请确认纯度满足实验要求。
- 内毒素水平:请查阅CoA中的内毒素含量信息,这对于细胞实验尤为关键,因为LPS污染可能干扰实验结果。
- 活性检测:在适用情况下,CoA可能提供功能活性数据(如钙调磷酸酶抑制活性)。请核实批次专属CoA中的活性规格。
- 操作:尽可能在冰上操作。使用低蛋白结合移液管吸头和离心管,以减少吸附损失。
- 个人防护装备:操作所有重组蛋白时,请遵循标准实验室安全规范:穿实验服、戴手套和护目镜。
- 废弃物处理:按照所在机构的生物安全和化学废弃物处理规定处置蛋白溶液。
常见问题
重组人CABIN1蛋白(rp376563)推荐使用何种复溶缓冲液?
该蛋白通常用无菌超纯水或PBS(pH 7.4)复溶。但最佳复溶缓冲液和体积详见随订单提供的批次专属质量检验报告(CoA)。请务必参阅该文件以获取最准确的操作指导。
如何储存重组人CABIN1蛋白以维持其活性?
复溶后,将蛋白分装为单次使用量,于−80 °C长期保存。若在一周内短期使用,可于4 °C保存。应避免反复冻融,因为这会导致蛋白聚集并降低生物活性。
重组人CABIN1蛋白已验证适用于哪些应用?
重组人CABIN1蛋白(rp376563)适用于蛋白-蛋白相互作用检测(pull-down、co-IP)、钙调磷酸酶磷酸酶抑制检测、结合动力学研究(SPR/BLI),以及在ELISA和Western blot中用作阳性对照。请参阅产品说明书和批次专属CoA,了解已验证的应用数据。
CABIN1蛋白是否会干扰钙调磷酸酶活性?如何在体外进行测定?
是的,CABIN1是钙调磷酸酶磷酸酶活性的内源性抑制剂。体外抑制活性可使用市售的钙调磷酸酶磷酸酶活性检测试剂盒(采用荧光底物或比色底物)进行测定。将CABIN1蛋白与固定浓度的活性钙调磷酸酶进行梯度滴定,并相对于无抑制剂对照测量底物去磷酸化程度。
重组人CABIN1蛋白是否适用于细胞实验?
这取决于您所用批次的内毒素水平,该指标对于细胞实验至关重要,以避免LPS介导的干扰效应。请查阅您的批次CoA中的内毒素规格。对于胞内应用,可能需要采用适当的蛋白递送方法(如转染试剂、细胞穿透肽融合等)。
参考文献
- Bhatt DL et al. — General reference: Lai MM et al. CABIN1 as calcineurin inhibitor. Please verify primary literature for CABIN1/calcineurin interaction.
- Youn HD et al. Interaction of CABIN1 with the Sin3/HDAC complex and its role in transcriptional repression. Needs primary literature verification.
- Aladdin Scientific. Recombinant Human CABIN1 Protein, SKU rp376563. Product Datasheet. Aladdin Scientific.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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