重组人CD16蛋白:常见问题与关键信息
重组人CD16蛋白:常见问题与关键信息
Recombinant Human CD16 Protein 是低亲和力免疫球蛋白Fc受体FcγRIII的重组表达形式,广泛应用于免疫学研究,用于研究NK细胞活化、抗体依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)及治疗性抗体的相互作用。
- 蛋白靶点
- CD16(FcγRIII,FCGR3)
- 物种
- 人源
- 表达系统
- 重组表达(宿主系统请以产品说明书为准)
- 主要功能
- 低亲和力Fc受体,介导NK细胞依赖性ADCC及免疫复合物识别
- 主要研究应用
- ADCC检测、抗体筛选、NK细胞研究、受体-配体结合实验
- 货号
- rp143817
CD16是什么?为何在研究中具有重要意义?
CD16,又称FcγRIII(Fc gamma受体III,由FCGR3A和FCGR3B基因编码),是免疫球蛋白G(IgG)Fc区的低亲和力受体。CD16存在两种亚型:CD16a(FcγRIIIa),表达于自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞和单核细胞;CD16b(FcγRIIIb),主要表达于中性粒细胞。
CD16a在抗体依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)中发挥核心作用,这是NK细胞识别并杀伤抗体包被靶细胞的关键免疫效应机制。因此,CD16是癌症免疫治疗、单克隆抗体药物开发及先天免疫调控研究的重要靶点。
重组人CD16蛋白可在体外受控条件下研究上述相互作用,避免了原代细胞分离引入的实验变异性。
重组人CD16蛋白的常见研究应用
重组人CD16蛋白广泛应用于免疫学及生物制药研究的多个领域:
- ADCC报告基因检测与结合实验:CD16蛋白用作捕获或检测试剂,评估治疗性抗体(如抗肿瘤单抗)能否有效结合CD16a——这是发挥ADCC活性的前提条件。
- 抗体筛选与工程改造:通过含重组CD16的结合实验,对Fc工程改造后具有增强CD16亲和力的抗体进行评价。
- NK细胞生物学:重组CD16支持在无细胞体系中研究NK细胞活化阈值、受体聚集及信号通路。
- ELISA与SPR:该蛋白可作为包被抗原或分析物,用于酶联免疫吸附实验(ELISA)和表面等离子共振(SPR)实验,测定IgG-Fc/CD16结合动力学。
- 药物开发质量控制:生物制药开发人员利用重组CD16评估含Fc生物制剂的批间一致性(Fc受体结合能力)。
储存、操作与复溶指南
正确储存和操作重组人CD16蛋白对于维持蛋白完整性和生物活性至关重要。以下为通用指导原则;请务必参阅具体产品说明书(货号:rp143817)以获取权威条件信息:
- 储存温度:冻干蛋白通常储存于−20 °C或−80 °C。避免反复冻融,以防蛋白聚集及活性丧失。
- 复溶:按说明书要求,用无菌去离子水或指定缓冲液将冻干蛋白复溶至推荐储存浓度。开瓶前应先将样品平衡至室温。
- 工作分装:复溶后应制备单次使用分装液,以减少反复冻融导致的降解。
- 载体蛋白:若需长期稳定储存稀溶液,可按说明书建议添加载体蛋白(如0.1% BSA)。
- 无菌操作:用于细胞实验时,复溶及操作全程应采用无菌技术。
注意:具体缓冲液组成、浓度及储存条件以产品说明书为准。使用前请查阅rp143817的产品说明书。
质量、纯度与验证
阿拉丁科学的重组人CD16蛋白(rp143817)在受控条件下生产,以确保批间重复性。此类重组蛋白通常评估的关键质量属性包括:
- 纯度:通过SDS-PAGE和/或HPLC评估。研究级重组蛋白的典型纯度目标为≥90%或≥95%;rp143817的具体纯度值载于产品说明书。
- 鉴别:通过蛋白质印迹(western blot)或质谱法确认。
- 生物活性:可通过与IgG-Fc或已知CD16结合配体的结合实验进行功能验证;具体活性检测方法请参阅产品说明书。
- 内毒素水平:通过LAL法等方法检测内毒素含量;低内毒素规格对细胞实验尤为重要。
研究人员应在使用前索取所用批次的质量检验报告(CoA),以确认所有质量参数符合要求。
常见问题
CD16是什么?重组蛋白形式有哪些亚型?
CD16(FcγRIII)是一种低亲和力IgG Fc受体,存在两种亚型:CD16a(FcγRIIIa),表达于NK细胞和巨噬细胞;CD16b(FcγRIIIb),表达于中性粒细胞。重组蛋白制剂通常对应CD16a的胞外域,该亚型是ADCC研究中功能相关的亚型。请在rp143817产品说明书中确认具体亚型信息。
如何复溶和储存重组人CD16蛋白?
将冻干的rp143817用无菌去离子水或产品说明书推荐的缓冲液复溶,开瓶前应先将样品平衡至室温。复溶后请分装成单次使用份量,以避免反复冻融,并按说明书要求储存于−20 °C或−80 °C。具体操作请务必参阅当前说明书及批次质量检验报告(CoA)。
重组人CD16蛋白可用于哪些实验类型?
重组人CD16蛋白适用于ELISA、表面等离子共振(SPR)、ADCC结合实验、抗体Fc工程改造验证研究及无细胞体系NK细胞信号研究。根据实验方案的不同,该蛋白可作为包被抗原、结合配体或检测试剂使用。具体功能适用性请参阅rp143817说明书中的活性数据。
该蛋白的内毒素水平是否适合细胞实验?
每批次rp143817的内毒素水平均经过检测,并在质量检验报告(CoA)中注明。对于细胞实验,必须确认内毒素含量符合实验要求,因为内毒素过高可能激活先天免疫通路并干扰实验结果。请联系阿拉丁科学或索取您所用批次的CoA。
CD16a的多态性(V158F)如何影响重组CD16结合实验?
CD16a在第158位存在一个特征明确的单核苷酸多态性(缬氨酸[V]或苯丙氨酸[F]),对IgG1和IgG3的结合亲和力有显著影响:V158变体与IgG的结合亲和力高于F158变体。在结合实验中使用重组CD16时,应确认您的rp143817批次中所含变体类型(V158或F158),因为这可能对抗体Fc工程改造或ADCC研究结果产生实质性影响。请查阅产品说明书或联系阿拉丁科学获取相关信息。
参考文献
- Ravetch JV, Bolland S. IgG Fc receptors. Annual Review of Immunology. 2001;19:275-290. doi:10.1146/annurev.immunol.19.1.275
- Bryceson YT, March ME, Ljunggren HG, Long EO. Activation, coactivation, and costimulation of resting human natural killer cells. Immunological Reviews. 2006;214:73-91. doi:10.1111/j.1600-065X.2006.00457.x
- Koene HR et al. FcγRIIIa-158V/F polymorphism influences the binding of IgG by natural killer cell FcγRIIIa, independently of the FcγRIIIa-48L/R/H phenotype. Blood. 1997;90(3):1109-1114. PMID:9242541
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