重组人CDCA7L蛋白:生产与使用实验方案
重组人CDCA7L蛋白:生产与使用实验方案
Recombinant Human CDCA7L Protein是一种针对细胞分裂周期相关蛋白7样(CDCA7L)基因产物的研究级重组蛋白,由Aladdin Scientific提供,用于支持细胞周期调控、转录控制及相关信号通路研究。
- 产品名称
- 重组人CDCA7L蛋白
- 货号
- rp375946
- 靶蛋白
- CDCA7L(细胞分裂周期相关蛋白7样)
- 物种
- 人(智人)
- 应用
- 细胞周期研究、转录调控研究、生化检测
- 储存建议
- 避免反复冻融;长期储存请分装于-80°C
CDCA7L的背景与生物学意义
CDCA7L(细胞分裂周期相关蛋白7样)是CDCA7的旁系同源物,属于与细胞周期进展和转录调控相关的蛋白家族。CDCA7L含有保守的锌指结构域,被认为可介导与染色质相关复合物的相互作用,包括HELLS(LSH)染色质重塑通路的组成成分。
研究表明,CDCA7L在DNA甲基化维持、基因组稳定性及细胞增殖调控中发挥重要作用。CDCA7L的失调与免疫缺陷-着丝粒不稳定性-面部异常(ICF)综合征相关通路有关,使其成为表观遗传学和癌症生物学研究的重要靶点。
该蛋白的重组形式(货号:rp375946)使研究人员能够在体外研究CDCA7L的功能、进行结合实验、制备抗体,并在受控条件下验证实验工具。
复溶与储存实验方案
复溶:复溶前,短暂离心小瓶,使冻干物料集中于底部。使用无菌去离子水或适当缓冲液(如PBS,pH 7.4)将蛋白复溶至产品说明书推荐的工作浓度。轻柔吹打混匀,切勿剧烈涡旋,以免蛋白变性。
工作浓度:按具体检测方案所需浓度准备工作分装液。请参阅产品说明书(参考编号:absea#PP-9580)获取批次特定的浓度和纯度信息。
短期储存:复溶后的蛋白在48–72小时内使用时,可于4°C短期保存。
长期储存:如需长期储存,请将复溶蛋白分装以减少冻融次数,并于-80°C保存。添加0.1% BSA等载体蛋白可提高长期储存稳定性。
注意:避免反复冻融,因为这可能显著降低蛋白活性和完整性。
推荐实验应用
重组人CDCA7L蛋白(rp375946)适用于多种体外研究应用,包括但不限于:
- SDS-PAGE和Western Blot:作为阳性对照,确认抗体特异性或验证针对CDCA7L的检测系统。
- ELISA开发:在夹心或竞争性ELISA格式中作为标准品或捕获抗原,用于定量生物样品中的CDCA7L。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:用于共免疫沉淀或pull-down实验,鉴定CDCA7L在染色质重塑或细胞周期复合物中的结合配体。
- 抗体制备免疫原:作为免疫原,用于制备针对人CDCA7L的单克隆或多克隆抗体。
- 生化及功能实验:用于研究CDCA7L在DNA甲基化、染色质重塑或转录调控中的作用的实验。
每种具体应用均应对蛋白进行梯度滴定,以确定最佳工作条件。
质量控制与操作注意事项
纯度验证:每批重组人CDCA7L蛋白均经过质量控制评估。请参阅每次发货附带的分析证书(CoA),获取批次特定的纯度、浓度和内毒素数据。
内毒素:进行基于细胞的实验时,请确认内毒素水平符合实验要求。请查阅CoA获取批次特定内毒素值。
操作:始终在冰上操作蛋白,以减少降解。使用低蛋白结合离心管和吸头,降低吸附损失。
个人防护装备:与所有研究试剂一样,操作时须佩戴手套、穿实验服等适当个人防护装备。尽管CDCA7L重组蛋白未被归类为危险品,仍须遵守标准实验室安全规范。
防污染:在整个复溶和分装过程中采用无菌技术,防止微生物污染,以免影响蛋白完整性和实验结果。
常见问题排查
Western Blot无信号:确认蛋白上样正确,且一抗能识别重组形式。查阅CoA确认分子量,并验证凝胶浓度适合预期蛋白大小。
功能实验中活性低:过多冻融次数是活性降低的常见原因。确保在初次复溶时已准备好分装液。验证实验缓冲液组成与CDCA7L稳定性兼容。
蛋白聚集:如观察到沉淀,使用前短暂离心(10,000 × g,5分钟,4°C)去除聚集体。可考虑添加温和去垢剂或调整盐浓度以改善溶解性。
ELISA背景高:优化封闭条件和抗体稀释比例。确保重组蛋白储液中无聚集体,以避免非特异性结合。
如问题持续存在,请携带批号和实验条件联系Aladdin Scientific技术支持,获取进一步协助。
常见问题
重组人CDCA7L蛋白推荐使用哪种复溶缓冲液?
重组人CDCA7L蛋白通常使用无菌去离子水或PBS(pH 7.4)复溶。请务必参阅批次特定的分析证书及产品说明书(absea#PP-9580)获取制造商推荐的复溶条件,因为不同配方的缓冲液要求可能有所不同。
应如何储存重组人CDCA7L蛋白以保持其活性?
短期使用时,于4°C保存不超过48–72小时。长期储存时,将复溶蛋白分装后于-80°C保存,以避免反复冻融。添加0.1% BSA等载体蛋白有助于维持稳定性。
重组人CDCA7L蛋白(rp375946)经过哪些应用验证?
该重组蛋白适用于SDS-PAGE、Western Blot阳性对照、ELISA标准品或抗原、蛋白-蛋白相互作用研究,以及作为抗体制备的免疫原等应用。研究人员应针对每种具体应用对蛋白进行验证,并参阅产品说明书了解已确认的活性。
CDCA7L的生物学功能是什么?
CDCA7L是CDCA7的旁系同源物,参与细胞周期调控、转录控制和染色质重塑,尤其通过与HELLS/LSH复合物的相互作用发挥功能。它与DNA甲基化维持和基因组稳定性有关,并与ICF综合征相关通路存在关联。
在Western Blot中使用CDCA7L蛋白信号低时如何排查?
首先,确认蛋白上样量适当,且抗体能识别重组形式。查阅CoA确认分子量,并确保凝胶浓度适合。同时确认蛋白未经历过多冻融次数,因为这会降低抗原性。
参考文献
- Absea Biotechnology. Product Data Sheet: Recombinant Human CDCA7L Protein, Reference PP-9580.
- Jenness C, et al. HELLS and CDCA7 comprise a bipartite nucleosome remodeling complex defective in ICF syndrome. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2018.
- Thijssen PE, et al. Mutations in CDCA7 and HELLS cause immunodeficiency-centromeric instability-facial anomalies syndrome. Nature Genetics. 2015.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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