重组人CHKB蛋白:常见问题与技术指南
重组人CHKB蛋白:常见问题与技术指南
Recombinant Human CHKB Protein 是人类胆碱激酶β(CHKB)酶的重组形式,专为研究磷脂生物合成、激酶活性及相关代谢与疾病通路而生产。
- 产品名称
- 重组人CHKB蛋白
- 货号
- rp375976
- 蛋白功能
- 催化胆碱磷酸化生成磷酸胆碱,是CDP-胆碱(Kennedy)通路合成磷脂酰胆碱的关键步骤
- 基因名称
- CHKB(又称CHK、CHETK)
- 物种来源
- 人类(智人)
- 应用
- 生化分析、酶活性研究、药物发现、磷脂代谢研究
- 储存建议
- 建议于-80°C储存,避免反复冻融(重组蛋白通用建议,请以产品说明书为准)
CHKB是什么?其研究意义何在?
CHKB(胆碱激酶β)是由人类CHKB基因编码的一种酶,催化CDP-胆碱(Kennedy)通路的第一步限速反应:以ATP为磷酸基团供体,将胆碱磷酸化生成磷酸胆碱。该反应是从头合成磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)的必要步骤,而这两者是真核细胞膜中最主要的磷脂成分。
CHKB在维持细胞膜完整性和磷脂稳态中发挥关键作用。CHKB基因突变与伴线粒体结构异常的先天性肌营养不良(巨线粒体型)相关,凸显了其重要的生理意义。此外,由于磷脂代谢异常是多种癌细胞的标志特征,胆碱激酶活性在肿瘤学研究中也备受关注。
重组人CHKB蛋白使研究人员能够在受控的体外环境中研究激酶动力学、筛选抑制剂,并探索CHKB相关疾病的分子机制。
产品规格与质量
阿拉丁科学重组人CHKB蛋白(货号:rp375976)专为生化及无细胞研究应用而设计。完整规格信息请以最新产品说明书为准,以下为此类重组激酶蛋白的通用参考信息:
- 表达体系:通常采用原核(如大肠杆菌)或真核(如昆虫细胞或HEK293细胞)表达体系生产,具体请查阅产品说明书。
- 纯度:阿拉丁重组蛋白通常经SDS-PAGE检测纯度>85–95%,具体纯度请参见产品质检报告(CoA)。
- 标签:可能含有亲和纯化标签(如His标签)以便纯化,标签类型及位置请查阅说明书。
- 制剂:通常以冻干形式或稳定缓冲液形式提供,详情请查阅产品说明书。
- 活性:可能经过功能活性验证(如对胆碱底物的激酶活性),批次特异性数据请参见CoA。
注意:所有具体数值(分子量、精确纯度、内毒素水平、活性单位)均需根据货号rp375976的产品说明书和质检报告核实。
储存、操作与复溶
正确储存和操作重组人CHKB蛋白对于维持其生物活性和实验重复性至关重要。以下指南为重组蛋白操作的最佳实践,请以产品说明书中的具体指导为准。
储存
- 长期储存请置于-80°C。
- 短期使用(1–2周内),根据制剂不同可在-20°C储存。
- 避免反复冻融,以防蛋白聚集、活性丧失及降解,建议首次使用时分装。
复溶(适用于冻干产品)
- 开瓶前将小瓶置于室温平衡,以减少冷凝水影响。
- 按说明书推荐体积加入无菌水或缓冲液,达到所需浓度。
- 轻柔吸打或摇动溶解,切勿剧烈涡旋。
- 静置10–15分钟待充分溶解后,短暂离心再使用。
操作
- 实验过程中请置于冰上。
- 使用低蛋白吸附管和吸头,减少蛋白吸附损失。
- 在稀释缓冲液中添加载体蛋白(如0.1% BSA)有助于在长时间分析中稳定蛋白。
重组人CHKB蛋白的研究应用
重组人CHKB蛋白是一种多功能试剂,适用于多种研究场景:
- 酶动力学研究:利用标准放射性或荧光激酶分析方法,测定胆碱磷酸化的动力学参数(Km、Vmax、kcat)。
- 抑制剂筛选:作为靶标酶用于高通量或聚焦筛选,鉴定胆碱激酶活性的小分子抑制剂,与癌症代谢和肌营养不良研究相关。
- 结构与生物物理研究:用于晶体学、冷冻电镜或生物物理分析(如SPR、ITC),表征CHKB结构及底物相互作用。
- 抗体验证:作为阳性对照抗原,用于Western blot或ELISA格式验证抗CHKB抗体。
- 疾病机制研究:探究CHKB相关先天性肌营养不良(巨线粒体型)及其他磷脂代谢障碍的分子机制。
- 药物发现:支持针对Kennedy通路治疗程序的靶标结合分析和构效关系(SAR)研究。
常见问题排查
若使用重组人CHKB蛋白时出现意外结果,请参考以下排查步骤:
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 无酶活性或活性偏低 | 储存不当或反复冻融导致蛋白降解 | 使用新鲜分装蛋白;核实储存条件;查阅CoA活性数据 |
| 蛋白沉淀或聚集 | 复溶方法不当或缓冲液不相容 | 按说明书复溶流程操作;使用推荐缓冲液并轻柔混合 |
| SDS-PAGE条带大小异常 | 标签对分子量的贡献;翻译后修饰;真核表达时的糖基化 | 与含标签理论分子量对比;查阅产品说明书 |
| 激酶分析背景偏高 | ATP污染或非特异性磷酸化 | 设置无酶对照;核实底物和ATP浓度 |
| 批次间结果不一致 | 批次间差异 | 索取每批次CoA;同时运行内部参考标准品 |
如问题仍未解决,请联系阿拉丁科学技术支持,并提供批号、CoA数据及实验方案详情。
常见问题
CHKB蛋白的生物学功能是什么?
CHKB(胆碱激酶β)催化ATP依赖的胆碱磷酸化反应,生成磷酸胆碱,这是CDP-胆碱(Kennedy)通路合成磷脂酰胆碱的第一步限速反应,对真核细胞膜磷脂的从头合成至关重要。
重组人CHKB蛋白(rp375976)采用何种表达体系生产?
rp375976的具体表达体系请以阿拉丁科学提供的产品说明书为准。重组CHKB蛋白通常根据供应商的生产工艺和预期应用,采用大肠杆菌、昆虫细胞(杆状病毒)或哺乳动物细胞体系表达。
如何储存重组人CHKB蛋白以保持其活性?
长期储存请将蛋白置于-80°C。首次使用时应分装,以避免反复冻融导致蛋白聚集和酶活性丧失。若产品为冻干形式,请在推荐温度下干燥保存,待复溶后使用。
重组人CHKB蛋白适用于哪些研究应用?
重组人CHKB蛋白适用于酶动力学研究、抑制剂筛选、结构与生物物理表征、抗体验证(作为阳性对照抗原),以及探究CHKB相关疾病(如巨线粒体型先天性肌营养不良)的机制研究,也可用于靶向磷脂代谢的药物发现项目。
重组人CHKB蛋白适合用于细胞实验吗?
重组人CHKB蛋白主要用于无细胞生化分析,如酶活性检测、抑制剂筛选和生物物理研究。是否适用于细胞实验取决于递送方式和实验设计,请查阅产品说明书或联系阿拉丁科学技术支持,获取针对您具体应用的建议。
哪些疾病与CHKB基因突变相关?
CHKB基因突变与巨线粒体型先天性肌营养不良(又称CHKB相关性肌营养不良)相关,这是一种罕见常染色体隐性遗传病,以肌肉无力和肌纤维线粒体结构异常(线粒体肿大)为特征。胆碱激酶活性的改变也在癌症代谢研究领域受到关注。
参考文献
- Aladdin Scientific. Recombinant Human CHKB Protein (rp375976). Product datasheet. Aladdin Scientific.
- Aoyama C, Liao H, Ishidate K. Structure and function of choline kinase isoforms in mammalian cells. Prog Lipid Res. 2004;43(3):266-281.
- Mak BC, et al. Mutations in CHKB cause megaconial congenital muscular dystrophy. Nature Genetics. 2011.
- Glunde K, Bhujwalla ZM, Bhujwalla S. Choline metabolism in malignant transformation. Nat Rev Cancer. 2011;11(12):835-848.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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