重组人FANCI蛋白:研究使用指南
重组人FANCI蛋白:研究使用指南
Recombinant Human FANCI Protein是范可尼贫血DNA修复通路的核心组分,作为单泛素化底物和染色质募集因子,在解决DNA链间交联的研究中发挥关键作用。
- 产品名称
- 重组人FANCI蛋白
- 货号
- rp377702
- 基因/蛋白靶点
- FANCI(范可尼贫血互补组I)
- 生物学功能
- 与FANCD2形成ID2复合物;在DNA链间交联修复过程中介导单泛素化及核灶形成
- 主要研究应用
- DNA修复实验、范可尼贫血通路研究、蛋白质相互作用研究、生化重组实验
- 推荐储存条件
- -80 °C长期储存;避免反复冻融
产品概述与生物学背景
重组人FANCI蛋白(货号:rp377702)是人范可尼贫血互补组I(FANCI)蛋白的重组形式。FANCI是范可尼贫血(FA)DNA损伤应答通路的核心组分,该通路是细胞修复DNA链间交联(ICL)的主要机制。ICL是一类高度细胞毒性损伤,能将双链DNA的两条链共价连接,阻碍复制与转录的正常进行。
FANCI与FANCD2形成稳定的异二聚体复合物,即ID2复合物。该复合物是FA通路的核心节点:在DNA损伤或复制压力条件下,FANCI和FANCD2均被FA核心泛素E3连接酶复合物进行单泛素化修饰。单泛素化触发ID2复合物定位至ICL损伤位点的染色质,并协调下游修复活动,包括核酸酶切割、跨损伤合成及同源重组。
FANCI基因突变导致范可尼贫血I亚型(FA-I),这是一种罕见的遗传性疾病,以骨髓衰竭、发育异常及恶性肿瘤风险显著升高为特征。Aladdin Scientific提供的重组蛋白支持对该关键通路的机制研究与转化研究。
复溶与操作规程
复溶操作:收到产品后,在开瓶前将冻干粉管简短低速离心(如2,000 × g,30秒),使物料集中至管底。使用适当缓冲液进行复溶,如含载体蛋白(例如0.1% BSA)的无菌磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4),或根据下游实验要求选择合适缓冲液。缓慢加入复溶缓冲液,轻柔吹打混匀;切勿振荡。
工作浓度:应针对各实验体系进行实验性确定。生化实验一般可参照产品说明书上标注的浓度配制储液,再按需稀释使用。
操作注意事项:
- 全程在冰上操作,以保护蛋白活性。
- 复溶后立即分装为单次使用剂量,避免反复冻融。
- 使用低吸附微量离心管,以减少蛋白吸附损失。
- 吸样时避免产生气泡。
质量检验:在关键实验前,建议通过SDS-PAGE或蛋白质印迹法(Western blot)确认蛋白完整性。在预期分子量处出现单一条带即可确认产品质量。
储存条件与稳定性
短期储存(最长2周):将复溶后的蛋白储存于4 °C。添加载体蛋白(如0.1% BSA)有助于在短期冷藏储存期间稳定蛋白。
长期储存:将复溶蛋白分装为单次使用量,于-80 °C保存。妥善储存的分装样品自收货之日起预计可稳定保存12个月;但在时效性实验前,建议提前验证蛋白活性。
注意避免:
- 反复冻融,可导致蛋白聚集及生物活性丧失。
- 在具有自动除霜功能的-20 °C冰箱中储存(存在温度循环波动)。
- 长时间暴露于室温。
注:具体稳定性数据、有效期及确切储存缓冲液组成详见随产品批次提供的产品说明书。请以各批次说明书为准。
实验应用与使用建议
重组人FANCI蛋白适用于范可尼贫血通路及DNA修复生物学领域的多种体外和无细胞生化研究:
- ID2复合物重组:FANCI可与重组FANCD2蛋白联合使用,重建ID2异二聚体,用于结构与功能研究,包括单泛素化实验。
- 蛋白质相互作用研究:可用于pull-down实验、免疫共沉淀对照或表面等离子共振(SPR)实验,以描绘其与FA核心复合物组分或下游修复因子的相互作用界面。
- DNA结合实验:FANCI具有DNA结合活性,可用于电泳迁移率变动实验(EMSA)或荧光偏振实验,表征其与各种DNA底物(包括含ICL双链)的相互作用。
- 泛素化实验:作为FA核心E3连接酶复合物的底物,重组FANCI可用于无细胞泛素化实验,研究通路激活与调控机制。
- 抗体验证:重组FANCI蛋白可作为阳性对照抗原,用于通过Western blot或ELISA验证FANCI特异性抗体。
建议针对每种具体应用对蛋白浓度、缓冲液条件及实验参数进行优化。请参阅Aladdin Scientific提供的产品说明书获取特定应用指导。
质量、安全与法规注意事项
质量保证:每批重组人FANCI蛋白在出货前均经过质量控制检测。具体质控数据包括纯度评估(通常通过SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色)、内毒素水平及生物活性结果,均记录在批次专属质量检验报告(CoA)中。请在下单时或收货后向Aladdin Scientific索取CoA。
纯度与内毒素:对于敏感的细胞实验,请核实内毒素水平是否符合实验体系要求。如对内毒素污染存有疑虑,请查阅CoA或联系Aladdin Scientific技术支持。
安全性:请按照BSL-1材料的标准实验室生物安全规程处理重组蛋白。操作时穿戴适当的个人防护装备(手套、实验服、护目镜)。该蛋白在标准实验室条件下不属于危险品;如需完整安全信息,请参阅所附安全数据表(SDS)。
出口与法规合规:本产品仅供科学研究使用(RUO),未经批准用于人或动物的诊断或治疗。用户有责任确保遵守所有适用的地方、国家及国际法规,涵盖生物研究材料的进出口及使用规定。
常见问题
重组人FANCI蛋白应使用何种缓冲液进行复溶?
含0.1% BSA的无菌PBS(pH 7.4)是重组蛋白常用的复溶缓冲液,有助于维持蛋白溶解性和活性。请务必参阅随产品提供的批次专属说明书,了解厂商针对该蛋白推荐的复溶缓冲液及用量,因为这些条件可能已针对该特定蛋白进行了优化。
如何储存重组人FANCI蛋白以保持其活性?
如需长期储存,请将复溶蛋白分装为单次使用量,于-80 °C保存,以避免反复冻融导致聚集和活性丧失。若在两周内使用,可在含BSA等载体蛋白的条件下于4 °C短期保存。请避免使用具有自动除霜功能的-20 °C冰箱,因其存在温度循环波动。
FANCI在范可尼贫血通路中发挥什么作用?
FANCI与FANCD2结合形成ID2异二聚体复合物,是范可尼贫血DNA链间交联修复通路的核心效应因子。在DNA损伤时,FANCI和FANCD2均被FA核心E3连接酶复合物单泛素化,触发其募集至ICL损伤位点的染色质,并协调下游修复过程,包括核酸酶切割、跨损伤合成及同源重组。
重组人FANCI蛋白能否用于抗体验证?
可以。重组人FANCI蛋白(rp377702)适合作为阳性对照抗原,通过Western blot或ELISA验证抗FANCI抗体,为确认抗体特异性和灵敏度提供明确、纯净的参考标准。
重组人FANCI蛋白是否适用于细胞实验或体内研究?
本产品主要针对体外生化及无细胞实验进行设计和验证,仅供科学研究使用(RUO),未经批准用于诊断或治疗。用于细胞实验的适用性取决于内毒素水平及具体实验要求;请参阅质量检验报告(CoA)并联系Aladdin Scientific技术支持获取指导。
参考文献
- Smogorzewska A, et al. Identification of the FANCI gene, the Fanconi anemia complementation group I gene. Cell. 2007;129(2):289-301. doi:10.1016/j.cell.2007.03.032
- Sims AE, et al. FANCI is a second monoubiquitinated member of the Fanconi anemia pathway. Nature Structural & Molecular Biology. 2007;14(6):564-567. doi:10.1038/nsmb1252
- Moldovan GL, D'Andrea AD. How the Fanconi anemia pathway guards the genome. Annual Review of Genetics. 2009;43:223-249. doi:10.1146/annurev-genet-102108-134222
- Liang CC, et al. The FANCD2-FANCI complex is recruited to DNA interstrand crosslinks before monoubiquitination of FANCD2. Nature Communications. 2016;7:12124. doi:10.1038/ncomms12124
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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