重组人FOXJ3蛋白:操作与使用实验方案
重组人FOXJ3蛋白:操作与使用实验方案
Recombinant Human FOXJ3 Protein是一种叉头框家族转录因子,以重组人源蛋白形式表达,适用于需要明确、高纯度蛋白试剂的生化及细胞生物学研究应用。
- 产品名称
- 重组人FOXJ3蛋白
- 货号
- rp367806
- 蛋白家族
- 叉头框(FOX)转录因子家族
- 物种来源
- 人(智人)
- 推荐储存条件
- -80°C长期储存;避免反复冻融
- 应用
- 生化检测、蛋白相互作用研究、转录因子研究
背景:FOXJ3与叉头转录因子家族
FOXJ3(叉头框J3)是进化上高度保守的叉头框(FOX)转录因子家族成员,以高度保守的翼状螺旋DNA结合结构域(即叉头结构域)为特征。FOX家族蛋白调控多种生物学过程,包括细胞周期进程、分化、发育及代谢。FOXJ3已被证实参与多种组织背景下的基因表达调控,其重组形式被用作研究DNA结合活性、蛋白-蛋白相互作用及体外下游信号通路的明确工具。
阿拉丁科学生产的重组人FOXJ3蛋白(rp367806)使研究人员能够在不依赖细胞裂解液的情况下开展可控生化实验,在转录因子研究中提供可重复的结果。
复溶实验方案
在使用前,按照以下步骤复溶重组人FOXJ3蛋白:
- 平衡至室温:开瓶前将样品瓶在室温下平衡约10–15分钟,以减少因冷凝引起的污染。
- 离心样品瓶:短暂离心(如1,000 × g,30秒),使运输过程中可能黏附于瓶盖或瓶壁上的蛋白沉降。
- 加入复溶缓冲液:用无菌超纯水或供应商推荐的缓冲液(通常为pH 7.4的PBS,如需要可加入终浓度0.1%的BSA作为载体蛋白)复溶冻干蛋白,缓冲液应沿瓶壁轻轻加入。
- 轻柔混匀:请勿涡旋振荡,轻柔吹打或旋转使蛋白完全溶解,必要时可等待5–10分钟以充分溶解。
- 分装:将复溶后的蛋白分装为单次使用量,避免反复冻融导致蛋白活性降低。
注意:具体复溶体积和缓冲液条件应以随批次提供的产品质量检验报告(CoA)为准。
储存、稳定性及操作建议
长期储存:将冻干蛋白储存于-20°C或-80°C的无霜冷冻箱中。冻干蛋白在正确储存条件下,自收货之日起通常可稳定保存12个月。
复溶后的蛋白:复溶后应立即分装并储存于-80°C,复溶蛋白在-80°C下通常可稳定保存3个月。应避免反复冻融,每次冻融均可能降低蛋白活性。
工作液:短期使用(不超过1周)时,复溶蛋白可在4°C下保存。如CoA有推荐,可加入终浓度0.1%的BSA等载体蛋白以提高冷藏保存期间的稳定性。
操作注意事项:操作复溶蛋白时应始终在冰上进行,使用低吸附微量离心管以减少吸附损失,并按照所在机构的生物安全指南穿戴适当的个人防护装备(PPE)。
实验应用
重组人FOXJ3蛋白适用于多种体外研究应用,包括但不限于:
- 电泳迁移率变动分析(EMSA):研究FOXJ3与靶标叉头响应元件(FHRE)的DNA结合活性。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:共免疫沉淀(Co-IP)或pull-down实验,用于鉴定FOXJ3的相互作用伙伴。
- 酶联免疫吸附测定(ELISA)标准品:作为FOXJ3特异性免疫检测中的阳性对照或定量标准品。
- 抗体验证:作为抗原,通过Western blot或斑点印迹验证抗FOXJ3抗体的特异性。
- 功能性生化检测:利用重组蛋白作为激活或抑制因子进行体外转录检测或报告基因检测。
请针对每种应用通过实验优化蛋白浓度,并参考最新文献了解FOXJ3在特定检测格式中的预期活性范围。
质量控制与法规注意事项
纯度与鉴定:重组人FOXJ3蛋白的每个批次均经过质量控制检测。使用前请通过SDS-PAGE验证纯度,并通过Western blot验证蛋白身份。每个批次均有质量检验报告(CoA)可供查阅,使用前应仔细核对。
内毒素检测:用于细胞实验时,请确保内毒素水平在CoA规定的可接受范围内(通常<1.0 EU/μg),因为内毒素污染可能干扰生物学实验结果。
仅限科研用途(RUO):重组人FOXJ3蛋白(rp367806)仅供科研使用,未经批准用于人体或动物的诊断或治疗应用。
生物安全分级:请按照所在机构的生物安全指南进行操作。该重组蛋白不属于特定管控制剂,但仍需遵守标准实验室安全注意事项。
常见问题
如何复溶重组人FOXJ3蛋白(rp367806)?
将样品瓶平衡至室温后短暂离心,使干燥蛋白沉降,然后沿瓶壁轻轻加入无菌超纯水或推荐缓冲液(如PBS pH 7.4 ± 0.1% BSA)。轻柔吹打混匀,切勿涡旋,随后立即分装并在-80°C下储存。请务必在产品CoA上确认具体复溶体积和缓冲液要求。
重组人FOXJ3蛋白可以耐受多少次冻融循环?
反复冻融已知会降低重组蛋白的活性,应尽量避免。最佳做法是在复溶后立即准备单次使用量的分装,并储存于-80°C,从而使每份分装仅经历一次解冻。对冻融循环的确切耐受次数因产品批次而异,应参考CoA或联系阿拉丁科学技术支持进行确认。
重组人FOXJ3蛋白(rp367806)是否适合用作Western blot阳性对照?
是的,重组蛋白被广泛用作Western blot实验中的阳性对照,用于确认抗体特异性和检测性能。将rp367806用作Western blot标准品时,应将适量蛋白与实验样品一同上样,并确认预期分子量条带与CoA中所述重组蛋白构建体大小一致。使用前请查阅CoA以获取分子量和标签信息。
FOXJ3的生物学功能是什么?
FOXJ3是叉头框(FOX)转录因子家族成员,通过与靶基因启动子中的叉头响应元件(FHRE)结合来调控基因表达。FOX家族成员参与多种生物学过程,包括发育、分化和代谢调节。FOXJ3在人类生理中的具体生物学功能仍是活跃的研究领域,请查阅最新同行评审文献以获取最新功能数据。
rp367806是否可用于细胞功能检测?
重组人FOXJ3蛋白可用于无细胞体外转录或报告基因检测。对于需要将重组蛋白递送至活细胞内的胞内应用,需采用合适的蛋白转导策略(如与细胞穿透肽融合或电穿孔)。在任何细胞实验体系中使用前,应确认内毒素水平在可接受范围内。请通过查阅最新文献和产品CoA验证其是否适用于特定检测格式。
参考文献
- Kaestner KH, Knochel W, Martinez DE. Unified nomenclature for the winged helix/forkhead transcription factors. Genes Dev. 2000;14(2):142-146. doi:10.1101/gad.14.2.142
- Hannenhalli S, Kaestner KH. The evolution of Fox genes and their role in development and disease. Nat Rev Genet. 2009;10(4):233-240. doi:10.1038/nrg2523
- Aladdin Scientific. Recombinant Human FOXJ3 Protein, SKU rp367806. Product datasheet. Aladdin Scientific.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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