重组人GCET1蛋白:操作与应用实验方案
重组人GCET1蛋白:操作与应用实验方案
Recombinant Human GCET1 Protein 是一种研究级重组蛋白,来源于生发中心B细胞表达转录本1基因,适用于免疫学检测、功能研究及淋巴瘤相关研究应用。
- 产品名称
- 重组人GCET1蛋白
- 货号
- rp368451
- 基因名称
- GCET1(生发中心B细胞表达转录本1)
- 物种来源
- 人源
- 应用
- ELISA、蛋白质印迹、功能检测及相关免疫学研究
- 储存建议
- 冻干蛋白应储存于-20°C或-80°C;避免反复冻融
重组人GCET1蛋白概述
GCET1由GCET1基因(又称C17orf40)编码,是一种优先在生发中心B细胞中表达的蛋白质。该蛋白已被确认为生发中心B细胞样(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的相关标志物,在淋巴瘤分类与研究领域具有重要意义。重组人GCET1蛋白(货号:rp368451)专为体外研究应用而生产,包括生物标志物研究、抗体验证及功能检测。研究人员应查阅产品专属说明书,以获取表达系统、标签信息、纯度等级及制剂详情,这些参数对实验设计至关重要。
复溶与储存方案
正确的复溶与储存对于维持重组人GCET1蛋白的生物活性和完整性至关重要。以下为一般性操作指导,具体体积和条件请务必参阅产品专属说明书:
- 离心:收到产品后,在开盖前对样品瓶进行短暂离心(1,000–2,000 × g,30秒),使冻干物料沉积于瓶底。
- 复溶:按说明书推荐浓度,用无菌去离子水或适当缓冲液(如PBS,pH 7.4)复溶冻干蛋白。加入复溶缓冲液后,在室温静置5–10分钟,轻柔旋转或吸管混匀。避免剧烈涡旋,以防蛋白变性。
- 分装:复溶后立即分装为单次使用量,以减少冻融次数。反复冻融已知会降低蛋白活性。
- 短期储存:如需尽快使用,可将复溶蛋白于4°C储存,保存期最长7天。
- 长期储存:长期储存时,将分装样品于-20°C或-80°C冷冻保存。添加载体蛋白(如0.1% BSA)有助于储存期间的蛋白稳定性;使用前请验证其与下游检测的相容性。
注意:具体复溶体积、推荐储存缓冲液及稳定性数据,请以Aladdin货号rp368451的官方产品说明书为准。
推荐应用与工作浓度
重组人GCET1蛋白适用于多种体外研究应用。以下指导反映了此类重组蛋白的一般最佳实践:
- ELISA(酶联免疫吸附试验):GCET1蛋白可作为夹心法或直接法ELISA中的标准品或捕获/检测抗原。建议从0.5–2 µg/mL开始,通过实验优化包被浓度。
- 蛋白质印迹(WB):可作为抗GCET1抗体验证的阳性对照。建议每泳道上样量以50–200 ng为起点,根据实验结果进一步优化。
- 抗体制备与验证:适用于作为免疫原或验证抗原,用于产生和筛选GCET1特异性抗体。
- 功能与结合检测:可用于与B细胞生物学及淋巴瘤研究相关的蛋白质-蛋白质相互作用研究和结合检测。
注意:已确认的应用数据及经验证的工作浓度范围,请以货号rp368451官方产品说明书为准。所有浓度均需根据您的具体实验体系进行优化。
质量控制与故障排除
确保重组人GCET1蛋白的质量与活性是获得可靠实验结果的关键。请参考以下质量控制措施和故障排除建议:
- 纯度评估:使用前通过SDS-PAGE验证蛋白纯度。研究级重组蛋白的典型纯度规格为≥85–95%;请查阅货号rp368451说明书获取具体规格。
- 身份确认:使用经验证的抗GCET1抗体通过蛋白质印迹确认蛋白身份。
- 活性检测:若说明书提供功能活性数据,建议在使用前进行初步活性检测,以确认批次间一致性。
- 常见问题及解决方法:
- 蛋白沉淀:确保复溶缓冲液相容且蛋白充分溶解;使用前短暂离心(10,000 × g,5分钟)去除聚集体。
- 检测信号偏低:通过SDS-PAGE检查蛋白完整性;确认储存条件是否得到维持;确保检测抗体能识别重组形式的蛋白。
- 储存后活性降低:尽量减少冻融次数;根据说明书建议,考虑添加BSA或甘油等稳定剂。
常见问题
什么是GCET1,它与淋巴瘤研究有何关联?
GCET1(生发中心B细胞表达转录本1)是一种优先在生发中心B细胞中表达的蛋白质,已被确认为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)GCB亚型的相关标志物。其表达模式使其在淋巴瘤亚型分类及B细胞分化通路研究中具有重要价值。
如何复溶重组人GCET1蛋白?
开盖前先对样品瓶进行短暂离心,然后按产品说明书推荐浓度,用无菌PBS(pH 7.4)或说明书指定缓冲液复溶冻干蛋白。轻柔旋转溶解,避免涡旋。室温静置5–10分钟后,立即分装并按指示储存。具体复溶操作请务必参阅货号rp368451官方说明书。
该重组蛋白可耐受几次冻融循环?
作为重组蛋白的一般操作原则,应尽量减少反复冻融次数,以保持蛋白完整性和活性。建议在首次复溶后立即准备单次使用量分装。货号rp368451具体的冻融耐受数据请以产品说明书为准。
重组人GCET1蛋白已经过哪些检测方法的验证?
重组人GCET1蛋白适用于ELISA、蛋白质印迹、抗体验证及功能结合检测等研究应用。货号rp368451的具体已验证应用列表及支持数据,请参阅Aladdin官方产品说明书或联系技术支持。
储存期间可以使用载体蛋白稳定GCET1吗?
添加载体蛋白(如0.1% BSA,即牛血清白蛋白)是储存重组蛋白时常用的稳定措施。但在使用前,请确认所添加成分与下游检测相容。货号rp368451的具体建议请查阅产品说明书。
参考文献
- Lossos IS, et al. Expression of a single gene, BCL6, strongly predicts survival in patients with diffuse large B-cell lymphoma. Blood. 2001. [GCET1 as GCB marker — needs verification against primary GCET1-specific literature]
- Abramson JS, Shipp MA. Advances in the biology and therapy of diffuse large B-cell lymphoma: moving toward a molecularly targeted approach. Blood. 2005. [General GCB-DLBCL biology context — GCET1 specific citation needs review]
- Aladdin Scientific. Recombinant Human GCET1 Protein, SKU rp368451. Product Datasheet. [Datasheet details not fully available in source material; all product-specific parameters require verification from official datasheet]
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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