重组人GINS1蛋白:核心参数与常见问题解答
重组人GINS1蛋白:核心参数与常见问题解答
Recombinant Human GINS1 Protein is a key component of the eukaryotic GINS tetrameric complex that plays an essential role in the initiation and elongation phases of chromosomal DNA replication.
- 产品名称
- 重组人GINS1蛋白
- 货号
- rp376523
- 蛋白功能
- GINS复合物亚基;对DNA复制起始和复制叉进展至关重要
- 物种来源
- 人源(智人)
- 产品形式
- 通过异源表达系统生产的重组蛋白
- 推荐储存条件
- 储存于-80°C;避免反复冻融
GINS1是什么?为何重要?
GINS1(在酵母中又称SLD5)是构成四聚体GINS复合物的四个亚基之一,其余三个亚基分别为GINS2、GINS3和GINS4。GINS复合物是真核生物复制体中高度保守的组成部分,对于DNA复制在复制起始位点的启动以及随后复制叉的持续推进均不可或缺。
GINS1与CDC45及MCM2-7解旋酶环相互作用,共同组成CMG(CDC45–MCM2-7–GINS)复合物——这是负责解开复制叉前方双链DNA的核心复制解旋酶。GINS1表达受阻会导致复制停滞,并与基因组不稳定性相关,使其成为癌症生物学、细胞周期调控及DNA损伤应答研究领域的重要研究对象。
产品规格与质量
Aladdin Scientific的重组人GINS1蛋白(货号:rp376523)通过重组表达工艺生产,适用于生化、生物物理及细胞生物学研究应用。研究人员应在产品说明书中确认以下关键属性:
- 表达系统:请在最新说明书中核实宿主系统(如大肠杆菌、杆状病毒/昆虫细胞或哺乳动物细胞),因为这将影响翻译后修饰状态。
- 纯度:目标纯度及分析方法(如SDS-PAGE、HPLC)在每批次随附的质量检验报告(CoA)中注明。
- 标签信息:用于纯化的融合标签或亲和标签(如His标签、GST标签)详见产品页面;在进行功能实验前,应确认标签是否已切除。
- 生物活性:功能验证数据(如有)详见产品说明书。
使用前请务必查阅批次特定的CoA以获取经确认的实际数值。
操作、储存与复溶
正确操作重组蛋白对于在实验中保持活性和重现性至关重要。以下通用最佳操作规范适用于重组人GINS1蛋白:
- 储存温度:长期保存请置于-80°C。根据制剂配方,短期储存于-20°C可能可行,请以说明书为准。
- 冻融次数:首次解冻后应分装为单次用量,以减少冻融次数。每次冻融均可能降低蛋白活性。
- 复溶:若以冻干形式供应,请按说明书指定的缓冲液(通常为无菌水或PBS)进行复溶。复溶后在室温下短暂平衡,轻柔混匀,切勿涡旋。
- 工作浓度:根据具体实验方案通过实验确定。如需指导,请参阅文献或联系Aladdin Scientific技术支持。
- 载体蛋白:在工作液中加入BSA(0.1–0.5%)有助于防止稀释过程中蛋白吸附于管壁。
研究应用
重组人GINS1蛋白适用于多种体外及无细胞研究应用,包括但不限于:
- 蛋白质相互作用研究:利用共免疫沉淀、pull-down或表面等离子共振(SPR)等实验,研究GINS1在CMG复合物或其他复制体组分中的结合伙伴。
- 生化重建:在体外重建GINS复合物或CMG解旋酶活性,用于DNA复制机制研究。
- 结构生物学:作为抗原或组分用于X射线晶体学、冷冻电镜或小角X射线散射(SAXS)实验。
- 药物发现:筛选干扰GINS复合物组装或CMG解旋酶活性的小分子抑制剂,在肿瘤学研究中具有重要意义。
- 抗体制备与验证:作为免疫原用于抗体制备,或作为Western blotting和ELISA的阳性对照。
在进行大规模实验前,研究人员应在其特定实验格式中对该蛋白进行验证。
常见问题
GINS1在人类细胞中的生物学功能是什么?
GINS1是四聚体GINS复合物的亚基,与CDC45及MCM2-7解旋酶共同组成CMG复合物,即真核生物的核心复制解旋酶。该复合物在复制叉处解开DNA双链,使复制机器能够合成新的DNA链。因此,GINS1对染色体DNA复制的起始和延伸阶段均不可或缺。
rp376523采用哪种表达系统生产?这是否影响蛋白功能?
rp376523(重组人GINS1蛋白)的具体表达宿主系统请以Aladdin Scientific当前产品说明书或质量检验报告(CoA)为准,因批次不同可能有所差异。表达系统(大肠杆菌、昆虫细胞或哺乳动物细胞)的选择会影响蛋白的折叠、溶解度及翻译后修饰。需要特定糖基化或磷酸化状态的研究人员应在购买前核实相关信息。
应如何储存重组人GINS1蛋白以保持其活性?
长期储存请置于-80°C。首次解冻后,应分装为单次用量,以避免反复冻融导致蛋白完整性下降和活性降低。请务必参阅批次专用说明书,了解推荐的储存缓冲液及稳定剂。若以冻干形式供应,请用指定缓冲液轻柔复溶,避免剧烈涡旋。
重组人GINS1蛋白能否用于抗体验证?
可以。rp376523等重组蛋白常作为Western blotting和ELISA中的阳性对照,用于验证抗体的特异性和灵敏度。该蛋白还可作为免疫原用于制备抗GINS1抗体。使用前请从CoA中确认蛋白纯度和预期分子量,以确保实验结果可靠。
rp376523是否适用于体外DNA复制重建实验?
重组人GINS1蛋白可作为无细胞重建实验的组分,用于组装有功能的GINS或CMG复合物。然而,成功重建解旋酶活性需要与其他GINS亚基(GINS2、GINS3、GINS4)、CDC45及MCM2-7复合物共表达或混合使用。研究人员在设计此类实验前,应参阅已发表的重建实验方案,并核实说明书中的蛋白活性数据。
参考文献
- Takahashi TS, Wigley DB, Walter JC. Pumps, paradoxes and ploughshares: mechanism of the MCM2-7 DNA helicase. Trends Biochem Sci. 2005;30(8):437-444. doi:10.1016/j.tibs.2005.06.007
- Gambus A, Jones RC, Sanchez-Diaz A, et al. GINS maintains association of Cdc45 with MCM in replisome progression complexes at eukaryotic DNA replication forks. Nat Cell Biol. 2006;8(4):358-366. doi:10.1038/ncb1382
- Seo YS, Hurwitz J. Isolation of DNA synthesis proteins from Xenopus egg extracts. Methods. 2001;25(2):221-231.
- Aladdin Scientific. Recombinant Human GINS1 Protein, SKU rp376523. Product Datasheet.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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