实验方案（Protocols）

重组人GON7蛋白：制备与使用实验方案

· · 发布于 2026年11月1日 · 更新于 2026年11月1日 ·

Recombinant Human GON7 Protein 是一种纯化的KEOPS复合物重组亚基，专为需要人源GON7组分的生化相互作用研究、复合物重建实验及功能性检测而设计。

产品名称: 重组人GON7蛋白
货号: rp367990
蛋白功能: KEOPS（激酶、内肽酶及其他小分子蛋白）复合物的亚基，参与tRNA修饰和端粒维护
物种来源: 人（智人）
应用: 生化检测、蛋白质相互作用研究、KEOPS复合物重建
储存建议: 冻干蛋白应储存于-20°C或-80°C；避免反复冻融

背景：GON7与KEOPS复合物

GON7（又称C14orf142）是进化上保守的KEOPS复合物的一个小型辅助亚基，该复合物还包含LAGE3、OSGEP、TP53RK和TPRKB。KEOPS复合物催化ANN解码tRNA第37位腺苷的苏氨酰氨甲酰化修饰（t6A修饰），这是一种在所有物种中普遍保守的修饰，对翻译保真性和效率至关重要。

除在tRNA修饰中的作用外，KEOPS复合物还与端粒维护、转录调控及DNA修复有关。GON7被认为可稳定该复合物并促进其组装，使其成为研究与KEOPS功能障碍相关遗传病（包括Galloway-Mowat综合征）的重要靶点。

复溶实验方案

所需材料：

重组人GON7蛋白（rp367990）
无菌去离子水或磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH 7.4）
如需提高稳定性，可使用载体蛋白溶液（如含0.1% BSA的PBS）
微量离心管（建议使用低吸附管）
冰

逐步复溶操作：

开瓶前，将冻干瓶在室温下平衡10–15分钟，以防止蛋白上出现水分凝结。
以低速（300–500 × g，30秒）短暂离心，将残留在瓶壁和瓶盖上的冻干物质沉降至底部。
向瓶中直接加入推荐体积的无菌PBS（pH 7.4）或去离子水复溶蛋白，轻轻旋转或用移液器混匀；勿涡旋振荡。
将复溶后的蛋白在冰上静置5分钟，确保完全溶解。
分装为单次使用量，以减少冻融次数；长期保存置于-80°C，短期保存（最长1个月）置于-20°C。

注意：请参阅产品专用数据表以获取确切的推荐复溶体积和浓度。如无数据表数值，请标记待审核。

储存与稳定性指南

正确储存重组人GON7蛋白对于维持其生物活性和结构完整性至关重要：

冻干形式：在干燥环境中储存于-20°C或-80°C。在此条件下，蛋白自生产日期起至少稳定12个月。
复溶形式：将工作分装品储存于-80°C。避免反复冻融，因为每次冻融循环均可能导致蛋白聚集和活性损失。每次实验应使用新鲜解冻的分装品。
工作溶液：解冻后在实验过程中置于冰上保存，并在同一工作日内使用完毕。已用于实验的复溶蛋白不得再次冷冻。
载体蛋白：在稀溶液中（尤其是浓度低于10 µg/mL时）加入载体蛋白（如0.1% BSA）可提高稳定性。

注意：本批次的具体稳定性数据应参照质量检验证书（CoA）加以确认。如无批次特定数据，请标记待审核。

实验应用与操作技巧

重组人GON7蛋白适用于多种研究应用。以下指导有助于确保最佳实验结果：

1. 蛋白质相互作用研究：GON7可用于pull-down实验或共免疫沉淀实验，以研究其与KEOPS复合物其他亚基（LAGE3、OSGEP、TP53RK、TPRKB）之间的相互作用。应优化盐浓度和去垢剂条件以保持天然相互作用。

2. KEOPS复合物重建：在体外重建完整KEOPS复合物时，以化学计量量混合各亚基，并在4°C下孵育足够时间以完成复合物组装。可通过尺寸排阻色谱或天然PAGE验证组装情况。

3. 生化及酶活性检测：每次实验均应设置适当的阳性和阴性对照。通过滴定蛋白浓度，确定特定检测格式的线性检测范围。

4. 一般操作技巧：

始终使用低吸附管和吸头，以减少因表面吸附造成的蛋白损失。
使用前将复溶蛋白在4°C下以10,000 × g离心5分钟，以去除聚集体。
在每个分装品上记录批号和复溶日期，以确保可追溯性。

质量控制与故障排除

质量控制：阿拉丁科学重组人GON7蛋白（rp367990）经生产和检测以确保稳定的纯度和性能。每批次通常通过SDS-PAGE和/或蛋白质印迹（Western blot）进行分析，以确认分子量和纯度。请参阅随每批货物提供的质量检验证书（CoA），获取批次特定的质量控制数据。

常见问题与故障排除：

问题	可能原因	建议措施
复溶后蛋白沉淀或浑浊	因复溶操作不当或温度冲击导致聚集	复溶前使样品瓶恢复至室温；轻柔复溶；离心去除聚集体
活性丧失	反复冻融或在-20°C长期储存	使用单次分装品；长期储存置于-80°C
结合实验无信号	蛋白浓度不足或缓冲液条件不兼容	滴定蛋白浓度；优化缓冲液pH和盐浓度
Western blot出现非特异性条带	交叉反应或抗体浓度过高	优化抗体稀释比例；设置适当对照

常见问题

重组人GON7蛋白（rp367990）的推荐复溶体积是多少？

推荐复溶体积详见每批次随附的产品数据表和质量检验证书（CoA）。一般而言，将冻干蛋白复溶于无菌PBS（pH 7.4）或去离子水中，以获得至少100 µg/mL的储液浓度。请务必参阅批次特定CoA以获取准确操作说明。

如何储存重组人GON7蛋白以维持其活性？

将冻干蛋白储存于干燥环境中的-20°C或-80°C，直至复溶使用。复溶后，分装为单次用量并储存于-80°C以供长期使用。避免反复冻融，因为这可能导致蛋白聚集和生物活性的显著损失。

重组人GON7蛋白适用于哪些实验应用？

重组人GON7蛋白适用于蛋白质相互作用研究、体外KEOPS复合物重建、pull-down实验、共免疫沉淀及生化表征实验。也可用作抗体验证的抗原。请参阅产品数据表确认其是否适用于您的特定实验。

GON7在KEOPS复合物中的功能是什么？

GON7是KEOPS复合物的一个小型辅助亚基，被认为有助于复合物的稳定性和组装。KEOPS复合物整体负责tRNA第37位的t6A（苏氨酰氨甲酰腺苷）修饰，该修饰对于准确高效的蛋白质翻译至关重要。包括GON7在内的KEOPS亚基突变已被证实与Galloway-Mowat综合征相关。

如何验证我的GON7蛋白批次的纯度和完整性？

每批重组人GON7蛋白均附有质量检验证书（CoA），详细列出纯度（通常通过SDS-PAGE评估）、鉴别及质量控制检测结果。在用于灵敏的下游实验前，应对复溶蛋白进行SDS-PAGE或Western blot检测，以确认预期的分子量和纯度。

参考文献

Wan LC, Mao DY, Neculai D, et al. Reconstitution and characterization of eukaryotic N6-threonylcarbamoylation of tRNA using a minimal enzyme system. Nucleic Acids Research. 2013.
Braun DA, Shril S, Sinha A, et al. Mutations in WDR4 as a new cause of Galloway-Mowat syndrome. American Journal of Human Genetics. 2018.
Arrondel C, Missoury S, Snoek R, et al. Defects in t6A tRNA modification due to GON7 and YRDC mutations lead to Galloway-Mowat syndrome. Nature Communications. 2019.

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

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探索主题：重组蛋白实验方案蛋白复溶 GON7 KEOPS复合物

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。