重组人GPA33蛋白:常见问题与应用指南
重组人GPA33蛋白:常见问题与应用指南
Recombinant Human GPA33 Protein 是人糖蛋白A33抗原的重组生产形式,该蛋白为I型跨膜蛋白,主要在胃肠道上皮细胞中表达,被广泛研究为结直肠癌的生物标志物和治疗靶点。
- 产品名称
- 重组人GPA33蛋白
- 货号
- rp368033
- 蛋白家族
- 免疫球蛋白超家族(IgSF),连接黏附分子相关蛋白
- 主要表达部位
- 胃肠道上皮细胞,在结直肠组织中高度表达
- 主要研究应用
- 结直肠癌研究、抗体验证、免疫治疗靶点研究
- 蛋白来源
- 人(智人)
GPA33是什么?其科学意义何在?
GPA33(糖蛋白A33),又称A33抗原,是属于免疫球蛋白超家族的I型跨膜糖蛋白,由GPA33基因编码,具有两个胞外免疫球蛋白样结构域、一个单次跨膜结构域和一个短的胞质尾部。
GPA33在胃肠道上皮细胞(从小肠至结肠)中呈组成型均匀表达。其高度限制性且稳定的表达模式——在超过95%的原发性和转移性结直肠癌中保持表达——使其成为结直肠癌研究中极具价值的生物标志物和治疗靶点。目前已在抗体-药物偶联物(ADC)、放射免疫治疗及双特异性抗体领域开展了相关研究。
GPA33生物学研究对从事胃肠道肿瘤学、上皮细胞生物学及肿瘤免疫学的研究人员具有重要意义。
重组人GPA33蛋白的典型研究应用有哪些?
重组人GPA33蛋白支持多种体外及生化研究应用,包括:
- 抗体开发与验证:用作免疫原或ELISA包被抗原,用于开发、筛选和验证抗GPA33抗体,适用于研究和治疗用途。
- 结合与相互作用研究:通过表面等离子共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)或pull-down实验评估蛋白质-蛋白质或蛋白质-抗体结合动力学。
- 功能性实验:支持研究GPA33在上皮细胞黏附和细胞旁通透性调节中的作用。
- 免疫治疗研究:作为参考标准,用于评估靶向GPA33的ADC载荷、CAR-T细胞构建体或双特异性抗体在结直肠癌模型中的效果。
- Western Blot和ELISA标准品:作为阳性对照或定量标准,用于检测内源性GPA33的免疫分析。
研究人员应根据蛋白质的制剂和标签配置确认其是否适用于特定检测格式。
重组人GPA33蛋白应如何储存和处理?
重组蛋白的正确储存和处理对维持其生物活性和结构完整性至关重要。重组人GPA33蛋白的一般最佳实践指南包括:
- 长期储存:在−80°C条件下储存以保持完整活性。避免反复冻融,因为这可能导致蛋白质聚集和活性损失。
- 短期储存:如果蛋白质将在1–2周内使用,可根据所提供的制剂缓冲液将分装品储存在−20°C或4°C。
- 分装:收到后,将蛋白质分装为单次使用量,以减少冻融压力。
- 复溶:如以冻干形式提供,应使用产品说明书规定的推荐稀释液(通常为无菌水或PBS)进行复溶。开瓶前应先使小瓶恢复至室温。
- 避免:反复冻融、在室温下长时间孵育,以及接触与下游实验不兼容的去污剂。
请务必参阅阿拉丁货号rp368033的具体产品说明书,以获取确认的储存条件、缓冲液成分和保质期信息。
质量、纯度及表达系统注意事项
重组蛋白的质量直接影响实验的可重复性和数据可靠性。在评估重组人GPA33蛋白时,研究人员应考虑以下参数:
- 表达系统:重组GPA33蛋白通常在哺乳动物(如HEK293)或昆虫细胞系统中生产,以保留翻译后修饰(如糖基化),这对于GPA33这种糖蛋白尤为重要。原核表达系统(如大肠杆菌)可产生非糖基化形式,适用于某些结构研究或抗体筛选研究。
- 纯度:研究级重组蛋白通常经SDS-PAGE检测纯度≥90%。请在rp368033的产品说明书上确认确切的纯度规格。
- 内毒素水平:对于基于细胞或体内研究,低内毒素水平至关重要。请查阅说明书中经LAL检测的内毒素值。
- 标签配置:蛋白质可能带有亲和标签(如His标签、Fc标签)以便于纯化。在设计结合或功能性实验时,应考虑标签的存在和位置,因为标签可能影响蛋白质构象或结合界面。
请联系阿拉丁科学技术支持团队,获取确认批次特定质量属性的分析证书(CoA)。
常见问题
GPA33在正常人体组织中的生物学功能是什么?
GPA33是一种跨膜糖蛋白,在胃肠道上皮细胞中组成型表达,被认为参与细胞-细胞黏附和细胞旁通透性调节,类似于其他参与紧密连接组织的免疫球蛋白超家族成员。其在正常上皮细胞中的精确信号传导作用仍是活跃的研究领域。
为什么GPA33被认为是有价值的结直肠癌靶点?
GPA33在大多数非胃肠道正常组织中表达极少,却在大量原发性和转移性结直肠癌中高度表达,具有良好的肿瘤/正常组织表达比。这种受限的表达谱降低了抗体治疗策略中脱靶毒性的风险,使GPA33成为结直肠癌放射免疫治疗、抗体-药物偶联物和双特异性抗体的理想靶点。
重组人GPA33蛋白可以用作ELISA包被抗原进行抗体筛选吗?
是的,重组GPA33蛋白通常作为ELISA格式中的包被抗原,用于筛选杂交瘤上清液或噬菌体展示文库中的抗GPA33抗体克隆。研究人员应通过实验优化包被浓度、封闭条件和检测试剂。请参阅rp368033的产品说明书了解推荐的工作浓度和兼容的实验条件。
在为实验选择重组人GPA33蛋白时,糖基化是否重要?
是的,糖基化对GPA33可能具有重要的功能意义,因为它在天然形式中是一种糖蛋白。对于需要天然样表位的实验(如抗体表位定位、受体结合研究或基于细胞的实验),首选具有真实糖基化的哺乳动物表达重组GPA33。对于糖基化不那么关键的结构研究或应用,来自原核表达的非糖基化形式可能是可接受的。请在产品说明书中确认rp368033是否在具有糖基化能力的系统中生产。
在使用重组人GPA33蛋白时如何最大限度地减少蛋白质降解?
为减少降解,蛋白质解冻后始终在冰上操作,使用低蛋白质结合管和移液头,如适合您的实验,可在工作溶液中加入蛋白酶抑制剂混合物,避免涡旋振荡(改用轻柔移液混合)。收到后立即预分装以防止反复冻融,不要将复溶蛋白在室温下放置过长时间。
参考文献
- Heath JK, White SJ, Johnstone CN, et al. The human A33 antigen is a transmembrane glycoprotein and a novel member of the immunoglobulin superfamily. Proc Natl Acad Sci USA. 1997;94(2):469-474.
- Ritter G, Cohen LS, Nice EC, et al. Characterization of posttranslational modifications of human A33 antigen, a novel palmitoylated surface glycoprotein of human gastrointestinal epithelium. Biochem Biophys Res Commun. 1997;236(3):682-686.
- Scott AM, Lee FT, Jones R, et al. A phase I trial of humanized monoclonal antibody A33 in patients with colorectal carcinoma: biodistribution, pharmacokinetics, and quantitative tumor uptake. Clin Cancer Res. 2005;11(13):4810-4817.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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