实验方案(Protocols)

重组人GPR143蛋白:操作与应用实验方案

Recombinant Human GPR143 Protein是一种研究级重组蛋白,靶向G蛋白偶联受体143,可帮助科学家在体外研究眼白化病通路、黑素小体生物发生及DOPA介导的信号传导。

产品货号
rp369402
蛋白靶点
GPR143(OA1),G蛋白偶联受体143
物种来源
人源
蛋白形式
重组蛋白;确切配方详情请参阅产品说明书
推荐储存条件
-20°C或-80°C储存;避免反复冻融(请以产品说明书为准)
主要应用
结合实验、基于细胞的功能检测、ELISA、Western blot(适用性请以说明书为准)

背景:GPR143及其生物学意义

GPR143,又称OA1(1型眼白化病蛋白),是一种X染色体连锁的G蛋白偶联受体,主要在黑素细胞、视网膜色素上皮(RPE)及其他含色素细胞中表达。与定位于质膜的经典GPCR不同,GPR143主要位于细胞内细胞器膜上,尤其是黑素小体和溶酶体。

GPR143作为L-DOPA(L-3,4-二羟基苯丙氨酸)的胞内受体发挥功能,L-DOPA是黑色素生物合成的中间产物。L-DOPA激活GPR143后可触发下游G蛋白信号级联,影响黑素小体的生物发生、成熟与转运。GPR143功能缺失突变会导致X染色体连锁1型眼白化病,主要表现为视网膜色素减退、视力下降及眼球震颤。

重组人GPR143蛋白(rp369402)为研究人员提供了一种明确的研究级工具,可用于研究受体-配体相互作用、筛选潜在调节剂及解析色素沉着障碍的分子机制。

试剂制备与复溶

正确复溶对维持蛋白活性和完整性至关重要。使用前请按以下步骤操作:

  1. 平衡温度:开瓶前将瓶子在室温下平衡约15分钟,勿加热加速解冻。
  2. 复溶缓冲液:用无菌超纯水或产品说明书中规定的缓冲液复溶冻干蛋白(如以冻干形式提供)。轻轻沿瓶壁加入复溶缓冲液,避免起泡。
  3. 轻柔混匀:轻轻旋转或吸打混匀,避免涡旋振荡以防蛋白变性。
  4. 离心:必要时可短暂离心(如500 × g,5秒),使瓶壁残留物集中后再开盖。
  5. 蛋白浓度验证:使用标准方法(如BCA或Bradford法)测定蛋白浓度以确认回收量。

注意:复溶体积和缓冲液成分的具体信息请以货号rp369402随附的产品专属说明书为准,配方细节优先于通用指导。

储存、稳定性与操作规范

从收货到使用全程维持冷链完整性,对保持GPR143蛋白活性至关重要。

  • 短期储存(≤1周):如需尽快使用,可在4°C保存。
  • 长期储存:分装后在-20°C或-80°C保存,长期储存一般推荐-80°C。
  • 冻融循环:尽量减少冻融次数,首次解冻时即分装成单次用量,避免反复冻融导致降解。
  • 载体蛋白:若蛋白浓度极低,可考虑添加载体蛋白(如0.1% BSA)以提高储存稳定性,但需确认下游应用与BSA兼容。
  • 注意避免:长时间暴露于室温、反复冻融及去污剂污染。

请务必参阅批次专属的质检报告(CoA)和产品说明书,获取稳定性数据和有效期信息。

故障排除与质量控制注意事项

如出现异常结果,请参考以下故障排除指导:

问题可能原因建议措施
蛋白活性丧失冻融降解或储存不当使用新鲜解冻的分装品;以单次用量分装后在-80°C储存
结合实验信号低蛋白浓度不正确或缓冲液不兼容通过BCA/Bradford法验证浓度;检查缓冲液pH值和盐浓度
聚集或沉淀蛋白浓度过高或缓冲液不兼容以10,000 × g离心10分钟;稀释蛋白或更换缓冲液
Western blot出现非特异性条带抗体交叉反应或蛋白降解优化抗体稀释比;使用新鲜蛋白分装品;设置阳性和阴性对照

质量控制方面,重组蛋白应符合质检报告中规定的纯度和活性标准。如结果超出预期参数,请联系Aladdin Scientific技术支持团队。

常见问题

GPR143是什么,为何与研究相关?

GPR143又称OA1,是一种在黑素细胞和视网膜色素上皮等色素细胞中表达的胞内G蛋白偶联受体。它作为L-DOPA的受体发挥作用,在黑素小体的生物发生和成熟中起核心作用。GPR143功能缺失突变导致X染色体连锁1型眼白化病,使其成为研究色素沉着障碍及潜在治疗干预的重要靶点。

如何复溶和储存重组人GPR143蛋白(rp369402)?

请按产品专属说明书的说明复溶蛋白,通常使用无菌超纯水或推荐缓冲液。复溶后分装成单次用量并在-80°C储存,以减少冻融次数。如在一周内使用,可在4°C保存。储存的具体指导请以该批次质检报告(CoA)为准。

重组人GPR143蛋白已通过哪些应用验证?

潜在应用包括配体结合实验、ELISA、Western blot阳性对照、基于细胞的功能检测以及共免疫沉淀等蛋白相互作用研究。但应用适用性必须以货号rp369402的产品说明书为准进行验证,因为并非所有应用都针对每个批次进行了正式验证。

如果复溶后发现蛋白聚集应如何处理?

如发现聚集或沉淀,以10,000 × g离心10分钟,取上清液使用。可考虑稀释蛋白或更换更兼容的缓冲液,并确保蛋白在复溶前未经历过度加热或反复冻融。

参考文献

  1. Schiaffino MV, et al. Molecular mechanisms of ocular albinism. Pigment Cell Res. 2007.
  2. Deng YJ, et al. GPR143 functions as an intracellular receptor for L-DOPA in melanocytes. J Biol Chem. General reference — verify specific publication details.
  3. Abcam / Manufacturer datasheet for Recombinant Human GPR143 Protein, referenced as absea#PQ-299.

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录: 实验方案(Protocols)

Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《重组人GPR143蛋白:操作与应用实验方案》. 阿拉丁知识库,更新于 2026年10月31日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/recombinant-human-gpr143-protein-handling-application-protocol.html
这篇文章对您有帮助吗? Yes No 有 1 人觉得有帮助