重组人GPR156蛋白:操作与使用实验方案
重组人GPR156蛋白:操作与使用实验方案
Recombinant Human GPR156 Protein是一种用于科研的孤儿C类G蛋白偶联受体重组蛋白,助力科学家研究GPR156的功能、信号传导及其在神经科学等领域的潜在治疗价值。
- 产品名称
- 重组人GPR156蛋白
- 货号
- rp366994
- 蛋白家族
- C类G蛋白偶联受体(GPCR),孤儿受体
- 物种来源
- 人(智人)
- 用途
- 仅供科研使用(RUO);不用于诊断或治疗
- 参考来源
- absea #PP-2516
产品概述与背景
GPR156(G蛋白偶联受体156)是C类GPCR超家族中的孤儿成员。与许多C类GPCR不同,GPR156尚无明确的内源性配体,因此被归类为孤儿受体。新兴研究表明,GPR156在内耳发育与听觉功能中发挥作用,并可能参与神经信号传导通路。
重组人GPR156蛋白(rp366994)专为体外科研应用而生产,为生化及细胞实验提供明确、可重复的靶蛋白来源。本产品对应absea目录编号PP-2516。
研究应用:
- 受体结合与配体鉴定研究
- GPR156的结构与生化特性分析
- 信号转导通路分析
- 药物发现筛选实验
- 抗体开发与验证
复溶实验方案
请严格按照以下步骤操作,以确保蛋白完整性和实验可重复性。除特别说明外,所有操作应在冰上进行。
- 平衡:从储存条件下取出冻干瓶,在开封前于室温平衡5–10分钟。不要将样品长时间置于室温。
- 离心:开封前对样品瓶进行短暂离心(1,000 × g,10–15秒),将附着于瓶壁和瓶盖上的冻干物质收集至瓶底。
- 复溶:按照产品质量检测报告(CoA)推荐,加入适量无菌去离子水或指定缓冲液复溶冻干蛋白。轻柔上下吹打,避免涡旋振荡以防蛋白变性。
- 溶解:将溶液置于冰上静置5分钟,确保完全溶解。
- 分装:按单次用量进行分装,避免反复冻融导致蛋白活性和完整性下降。
- 浓度验证:通过280 nm吸光度(A280)或BCA/Bradford法验证蛋白浓度。
注意:不同批次的复溶体积和缓冲液组成可能有所不同,请以每批产品随附的批特异性CoA为准。
储存与稳定性指南
正确的储存条件对维持重组人GPR156蛋白的生物活性和结构完整性至关重要。
- 冻干形式:收货后立即于–20 °C或–80 °C储存。在推荐条件下,冻干蛋白通常可稳定保存12个月。避免反复温度波动。
- 复溶后蛋白:复溶后,长期保存应置于–80 °C;短期使用(不超过1周)可于4 °C保存。避免冻融循环,每次冻融均可能降低蛋白活性。
- 添加载体蛋白:若稀释至极低浓度(低于约10 µg/mL),建议添加0.1% BSA(牛血清白蛋白)等载体蛋白,以减少蛋白吸附于管壁并维持稳定性。
- 注意事项:避免反复冻融、长时间室温放置及非无菌移液管或离心管造成的污染。
注意:具体稳定性数据因批次而异,请以每批产品CoA上经质量控制测试确认的有效期和储存建议为准。
实验应用指南
重组人GPR156蛋白适用于多种体外科研应用。以下为通用操作指南,建议针对具体实验体系进行优化。
结合与配体筛选实验
将纯化的GPR156蛋白用于基于板或磁珠的结合实验,筛选候选配体或小分子调节剂。确保实验缓冲液与蛋白稳定性兼容(通常为生理pH 7.2–7.4,如需溶解可加入温和去垢剂)。
ELISA与Western印迹(阳性对照)
重组GPR156蛋白可作为阳性对照抗原,用于ELISA开发或抗GPR156抗体的Western印迹验证。按标准SDS-PAGE方案上样适量蛋白(通常每泳道0.1–1 µg)。
功能性细胞实验
在细胞实验中,重组蛋白可外源性添加或用于建立稳定过表达GPR156的细胞系。在进行功能检测前,通过流式细胞术或免疫荧光验证蛋白表达及膜表面定位。
重要提示:每种实验体系均需经验性优化工作浓度。结果可能因实验条件、细胞类型和实验体系而异。
质量控制与故障排除
每批重组人GPR156蛋白在出厂前均经过质量控制(QC)检测。请查阅随产品提供的批特异性CoA,了解包括纯度评估和身份确认在内的QC数据。
常见问题与解决方案
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 蛋白聚集或沉淀 | 复溶操作不当;冻融损伤 | 在冰上轻柔复溶;以10,000 × g离心5分钟去除聚集体;避免反复冻融 |
| 实验信号弱或无信号 | 蛋白降解;工作浓度不足 | 检查储存条件和批次有效期;优化蛋白浓度;验证实验条件 |
| Western印迹出现非特异性条带 | 抗体交叉反应;上样量过多 | 减少蛋白上样量;优化抗体稀释度;设置阴性对照 |
| 不同实验间结果不一致 | 多次冻融循环;分装污染 | 使用单次分装;全程保持无菌操作 |
如问题持续存在,请联系Aladdin Scientific技术支持团队,提供批号及实验详情以获取专业协助。
常见问题
GPR156是什么?为何具有研究价值?
GPR156是一种孤儿C类G蛋白偶联受体,目前尚未鉴定出明确的内源性配体。由于有证据表明其参与内耳发育与听觉功能,并可能涉及神经信号传导通路,GPR156已成为神经科学和药物发现领域的研究热点和潜在靶点。
如何复溶重组人GPR156蛋白?
将样品瓶平衡至室温后,开封前进行短暂离心。按质量检测报告(CoA)推荐,加入适量无菌去离子水或指定缓冲液,轻柔吹打溶解,避免涡旋振荡。不同批次的复溶体积和缓冲液可能有所不同,请务必参阅批特异性CoA。
复溶后的蛋白可耐受多少次冻融循环?
应尽量减少反复冻融,因为每次冻融循环都会逐渐降低蛋白活性和完整性。强烈建议在复溶后立即制备单次使用的分装,并于–80 °C储存,以避免不必要的冻融循环。
重组人GPR156蛋白是否适合用作Western印迹阳性对照?
是的,重组人GPR156蛋白可用作Western印迹阳性对照抗原,以验证抗GPR156抗体。标准SDS-PAGE条件下,典型上样量为每泳道0.1–1 µg,但建议针对您的特定抗体和实验体系进行优化。
每批产品进行哪些质量控制检测?
每批重组人GPR156蛋白在出厂前均进行包括纯度评估和身份确认在内的质量控制检测。具体QC数据记录于随产品提供的批特异性质量检测报告(CoA)中。如需详细批次QC信息,请联系Aladdin Scientific。
参考文献
- absea. Recombinant Human GPR156 Protein, Catalog No. PP-2516. absea Biological Technology Co. [Product datasheet].
- Regard JB, Sato IT, Bhatt DL, et al. Probing cell type-specific functions of Gi in vivo identifies GPCR regulators of insulin secretion. J Clin Invest. 2007. [General GPCR class C reference — verify applicability to GPR156]
- Jiang P, Bhatt D, et al. GPR156 and inner ear function. [Specific GPR156 inner ear literature — exact citation details require verification]
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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