ING1的研究背景与生物学意义

ING1（生长抑制因子家族成员1）是ING家族抑癌蛋白的创始成员，由位于人类13q34染色体的ING1基因编码，在人体各组织中广泛表达。ING1是细胞周期进程、DNA损伤信号传导及程序性细胞死亡的关键调控因子。

在结构上，ING1的C末端含有保守的植物同源结构域（PHD）指，可特异性识别并结合组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）——该修饰与活跃转录的基因启动子相关。通过此相互作用，ING1可将组蛋白乙酰转移酶（HAT）或组蛋白去乙酰化酶（HDAC）复合体募集至染色质，以上下文依赖的方式调控靶基因表达。

ING1还可与p53相互作用，在DNA损伤后增强p53依赖的转录应答。在乳腺癌、黑色素瘤和胃癌等多种人类肿瘤中已记录到ING1表达缺失。重组人ING1蛋白支持上述功能的体外生化表征，并可作为抗体验证和相互作用研究的参考标准。

复溶与储存指南

复溶：开启冻干蛋白瓶前，先将其在室温平衡10–15分钟。按产品数据表中指示的体积，用无菌去离子水或推荐复溶缓冲液溶解蛋白，以获得所需工作浓度。轻柔吹打混匀，切勿涡旋，剧烈震荡可能破坏蛋白三级结构。

载体蛋白：若重组蛋白不含载体，建议加入牛血清白蛋白（BSA）至终浓度0.1%，以提高稳定性并防止蛋白在稀释和储存过程中吸附于管壁。

分装：复溶后立即制备单次用量分装，避免反复冻融导致蛋白聚集、活性丧失及实验重复性下降。

储存条件：

• 短期（最长1周）：4°C保存。
• 长期：-80°C无霜冷冻保存，避免存放于频繁开门的-20°C冰箱。
• 避免反复冻融，最多建议冻融2–3次。

保质期：请参阅批次检验报告（CoA）获取具体有效期信息。按推荐条件储存时，通常自收货之日起保质12个月。

分步应用操作方案

重组人ING1蛋白适用于多种下游应用。以下为适用于蛋白相互作用与染色质结合研究的通用实验流程。

所需材料：

• 重组人ING1蛋白（rp365449）
• 结合缓冲液：50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，0.05% Tween-20，1 mM DTT
• 蛋白酶抑制剂混合物
• BSA（用于封闭）
• SDS-PAGE试剂（用于质量验证）

第一步——SDS-PAGE质量验证：使用前，取1–2 µg复溶蛋白在还原条件下进行12% SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色后确认条带分子量与ING1预期大小一致（具体亚型分子量请参阅产品数据表）。单一主带表明纯度较高。

第二步——蛋白相互作用/下拉实验：

1. 将珠子固定的ING1蛋白（或GST/His标签诱饵蛋白）在含1% BSA的结合缓冲液中，4°C预封闭30分钟，以减少非特异性结合。
2. 按实验设计的摩尔比加入猎物蛋白（如p53或组蛋白肽段）。
3. 4°C旋转孵育1–2小时。
4. 用结合缓冲液洗涤磁珠3次（每次400 µL），去除未结合蛋白。
5. 用SDS上样缓冲液洗脱结合蛋白，95°C煮沸5分钟，经SDS-PAGE后进行Western blot或银染分析。

第三步——ELISA检测：ING1蛋白可作为包被抗原（0.5–2 µg/mL，碳酸盐缓冲液，pH 9.6）用于ELISA，以筛选抗体特异性或验证自制抗体。请参照标准间接ELISA流程，使用适当封闭剂（1–5% BSA或脱脂奶粉）及二抗检测。

第四步——凋亡相关功能实验：在检测ING1介导凋亡的实验中，可将重组ING1加入无细胞凋亡重建体系，或在免疫共沉淀实验中作为对照标准品使用。请针对每种实验体系经验性优化蛋白浓度。

故障排查与质量控制

以下为使用重组人ING1蛋白时常见问题的排查指导：

每次实验应同时设置阳性对照（如已知活性的重组蛋白），以验证实验体系性能。对于发表级实验，应保留每批次产品的CoA文件备查。

安全、法规与订购信息

安全性：重组人ING1蛋白仅供体外科学研究使用，未经批准用于人体或动物的诊断或治疗。操作时请遵守标准实验室防护规程，佩戴手套和护目镜等个人防护装备（PPE）。使用前请查阅随产品提供的安全数据表（SDS）。

生物安全：本蛋白在受控条件下生产。然而，与所有生物试剂一样，应将其视为潜在生物危害物处理，按照所在机构的生物安全规程及当地法规进行废弃处置。

法规状态：仅供科学研究使用（RUO），不用于临床诊断。

订购信息：

• 产品名称：重组人ING1蛋白
• 货号：rp365449
• 供应商参考编号：absea#PP-1020
• 供应商：Aladdin Scientific

请联系Aladdin Scientific当地销售代表或访问Aladdin官网，申请报价、查询库存，并下载最新产品数据表及批次CoA，获取纯度（%）、内毒素水平及生物活性等批次特异性质量参数。