重组人INPP1蛋白:特性与研究指南
重组人INPP1蛋白:特性与研究指南
Recombinant Human INPP1 Protein是一种研究级重组酶,代表人源肌醇多磷酸1-磷酸酶,专为支持针对肌醇磷酸代谢的生化分析、通路研究及药物发现项目而设计。
- 产品名称
- 重组人INPP1蛋白
- 货号
- rp365232
- 蛋白功能
- 催化肌醇1-磷酸及肌醇1,4-二磷酸的去磷酸化,调控肌醇磷酸信号通路
- 研究领域
- 肌醇磷酸信号传导、神经科学、代谢性疾病、锂离子敏感通路
- 蛋白来源
- 人源(智人)
- 应用
- 酶活性检测、抑制剂筛选、通路重建、结构研究
INPP1是什么?为何重要?
肌醇多磷酸1-磷酸酶(INPP1)是一种依赖镁离子的磷酸单酯酶,由人类INPP1基因编码。它催化肌醇1-磷酸(Ins1P)和肌醇1,4-二磷酸(Ins(1,4)P2)水解生成游离肌醇,这是磷脂酰肌醇生物合成中肌醇循环利用的关键步骤。
INPP1对锂离子(Li+)的抑制作用尤为敏感,使其成为研究锂盐治疗双相障碍作用机制的重要靶点。通过抑制INPP1(及相关酶IMPase),锂盐被认为可耗竭游离肌醇,从而抑制过度活跃的磷酸肌醇信号——这是肌醇耗竭假说的理论基础。
除神经精神病学研究外,INPP1活性还与代谢调节、细胞应激反应和发育生物学密切相关,使重组INPP1蛋白成为多个学科领域的重要研究试剂。
蛋白特性与质量属性
重组人INPP1蛋白(rp365232)采用重组表达技术生产,提供具有功能活性的人源酶形式。INPP1的主要生化特性包括:
- 酶的分类:磷酸单酯酶(EC 3.1.3.57)
- 金属辅因子需求:依赖镁离子(Mg2+);EDTA或EGTA螯合后活性丧失
- 底物特异性:作用于Ins1P和Ins(1,4)P2;不能有效水解Ins(1,4,5)P3或更高级别肌醇磷酸酯
- 抑制剂敏感性:在生理相关浓度下被锂离子竞争性抑制
- 分子量:约44 kDa(单体);请以产品数据表为准
有关具体纯度、内毒素水平、比活性值及制剂详情,请参阅Aladdin Scientific产品页面上rp365232的官方产品数据表。每批次出货均附带批次特异性质量数据。
推荐操作、储存及复溶方案
正确操作重组人INPP1蛋白对于维持酶活性和确保实验结果的可重复性至关重要。请遵循以下指南:
储存
- 将冻干蛋白储存于–20 °C或–80 °C(以数据表规定为准),置于干燥环境中。
- 避免反复冻融;首次复溶后应立即分装。
- 液态制剂应在–80 °C长期保存以维持稳定性。
复溶
- 用无菌超纯水或产品数据表指定的缓冲液复溶冻干蛋白。
- 开瓶前先将小瓶平衡至室温。
- 用移液器轻柔混匀;勿涡旋振荡。
- 如冻干粉饼发生位移,开瓶前先短暂离心收集内容物。
工作条件
- 在所有检测缓冲液中加入Mg2+(通常为1–10 mM MgCl2);INPP1依赖Mg2+。
- 避免使用含EDTA的缓冲液,EDTA会螯合Mg2+并使酶活性丧失。
- 最适pH范围通常为7.5–8.5;请以数据表为准。
- 稀释至低浓度时加入载体蛋白(如0.1% BSA),以防止吸附损失。
注:所有具体缓冲液组成、复溶体积及推荐工作浓度均应参照rp365232随附的批次特异性数据表进行核实。
重组人INPP1蛋白的研究应用
重组人INPP1蛋白(rp365232)支持多种体外研究应用:
- 酶活性检测:使用比色法或荧光法磷酸检测试剂,测定INPP1介导的Ins1P或Ins(1,4)P2底物磷酸释放。
- 抑制剂及药物筛选:作为生化靶点用于小分子抑制剂的高通量或精准筛选,包括与双相障碍研究相关的拟锂化合物。
- 肌醇磷酸通路重建:整合到无细胞系统中,研究磷脂酰肌醇循环的动态变化。
- 结构与生物物理研究:结合适当的样品制备方法,适用于X射线晶体学、冷冻电镜或生物物理相互作用研究。
- 抗体验证:作为阳性对照抗原,用于Western blot、ELISA或免疫沉淀流程中验证抗INPP1抗体。
- 比较酶学:与相关磷酸酶(IMPase、INPP5)进行动力学比较,以解析通路特异性。
鼓励研究人员根据其具体实验情境优化检测条件,并参阅产品数据表中的推荐应用说明。
法规状态与质量保证
Aladdin Scientific提供的重组人INPP1蛋白(rp365232)仅供研究使用(RUO),未经批准用于人或动物的诊断、治疗或临床用途。
每批次评估的质量属性可能包括:
- SDS-PAGE或HPLC纯度检测
- LAL法内毒素水平检测
- 比酶活性测定
- 质谱或Western blot身份确认
所有质量数据均记录在随每批次出货提供的质量检验证书(CoA)中。研究人员应妥善保存CoA以备实验记录。如需额外技术支持、批次特异性数据查询或定制生产咨询,请联系Aladdin Scientific技术支持团队。
常见问题
INPP1酶活性检测应使用何种缓冲液?
INPP1的活性依赖Mg2+,因此检测缓冲液中应含有1–10 mM MgCl2。典型缓冲液为含MgCl2的50 mM Tris-HCl或HEPES(pH 7.5–8.5)。避免使用含EDTA或EGTA的缓冲液,因其会螯合镁离子并消除酶活性。具体缓冲液建议请参阅rp365232产品数据表。
如何储存重组人INPP1蛋白以延长其保质期?
按产品数据表规定,将冻干蛋白储存于–20 °C或–80 °C的干燥环境中。复溶后,制备单次使用分装液并储存于–80 °C,以避免反复冻融导致酶活性下降。请参阅批次特异性CoA获取已确认的稳定性数据。
重组人INPP1蛋白能否用于锂离子抑制研究?
可以。INPP1是公认的锂离子敏感性磷酸酶,在治疗相关浓度下被Li+竞争性抑制。重组人INPP1蛋白(rp365232)适用于体外抑制实验,以表征锂盐的作用机制,并用于筛选与双相障碍药物发现相关的拟锂化合物或其他INPP1抑制剂。
该蛋白是否适用于X射线晶体学等结构生物学应用?
重组人INPP1蛋白可能适用于结构研究,但适用性取决于批次的纯度、均一性和比活性。在启动晶体学或冷冻电镜项目之前,请联系Aladdin Scientific技术支持,讨论批次质量数据及任何定制需求(如标签去除或替代缓冲液配方)。
在INPP1酶活性检测中应包含哪些对照?
应包含无酶阴性对照(仅底物加缓冲液)以确定磷酸背景基线、热灭活酶对照以确认信号特异性,以及锂离子抑制反应作为药理学阳性对照。如有条件,已知比活性的参考批次可作为批间校准标准。
参考文献
- Berridge MJ, Irvine RF. Inositol phosphates and cell signalling. Nature. 1989;341(6239):197–205. doi:10.1038/341197a0
- Hallcher LM, Sherman WR. The effects of lithium ion and other agents on the activity of myo-inositol-1-phosphatase from bovine brain. J Biol Chem. 1980;255(22):10896–10901. PMID:6254986
- Berridge MJ. Inositol trisphosphate and diacylglycerol: two interacting second messengers. Annu Rev Biochem. 1987;56:159–193. doi:10.1146/annurev.bi.56.070187.001111
- Aladdin Scientific. Recombinant Human INPP1 Protein (rp365232) Product Datasheet. Aladdin Scientific; [date not specified].
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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