重组人激肽释放酶5蛋白：研究指南
重组人激肽释放酶5蛋白：研究指南
Recombinant Human Kallikrein 5 Protein是一种类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶，在表皮脱屑和皮肤屏障稳态中发挥关键作用，是研究皮肤疾病、蛋白酶信号级联及相关治疗靶点的重要研究工具。
- 蛋白质名称
- 重组人激肽释放酶5（KLK5）
- 蛋白质家族
- 激肽释放酶相关肽酶（丝氨酸蛋白酶）家族
- 主要功能
- 类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶；介导表皮脱屑和细胞外基质重塑
- 主要研究应用
- 皮肤屏障研究、蛋白酶底物谱分析、内瑟顿综合征建模、生物标志物研究
- 表达系统
- 重组表达系统（具体宿主系统请参阅产品数据表确认）
- 相关产品编号
- rp368170
KLK5的生物学背景与功能
激肽释放酶5（KLK5），又称激肽释放酶相关肽酶5或角质层类胰蛋白酶（SCTE），是一种分泌型丝氨酸蛋白酶，属于激肽释放酶相关肽酶（KLK）家族。该家族共包含15个成员（KLK1–KLK15），其编码基因簇位于人类19号染色体q13.4区域。
KLK5具有类胰蛋白酶活性，优先在精氨酸和赖氨酸残基的C端切割肽键。在表皮中，KLK5主要在颗粒层和角质层表达，在调控脱屑的蛋白水解级联反应中发挥核心作用——脱屑即角质细胞从皮肤表面的有序脱落。KLK5可激活其他KLK家族成员，包括KLK7和KLK14，使其成为更广泛的激肽释放酶蛋白酶网络的上游调控因子。
KLK5活性的失调与多种皮肤病理状态有关。在内瑟顿综合征中，该病由SPINK5基因（编码丝氨酸蛋白酶抑制剂LEKTI）的功能缺失突变引起，KLK5活性失控导致过度脱屑、皮肤屏障缺陷及特应性表现。KLK5目前也被研究作为某些上皮性肿瘤的生物标志物和潜在治疗靶点。
生化特性与重组蛋白注意事项
重组人激肽释放酶5蛋白（货号：rp368170）采用重组表达技术生产，为体外研究提供经充分表征的研究级丝氨酸蛋白酶。以下生化特性对实验设计至关重要：
- 蛋白酶类别：丝氨酸蛋白酶；催化三联体由His、Asp和Ser残基组成，为糜蛋白酶超家族的典型特征。
- 底物特异性：类胰蛋白酶；在Arg和Lys残基后切割。常用荧光底物如Boc-Val-Pro-Arg-AMC或Tos-Gly-Pro-Arg-pNA进行活性检测。
- 酶原激活：KLK5以无活性酶原（pro-KLK5）形式合成，需经蛋白水解激活。重组制剂可能以活性酶或酶原形式提供，具体取决于产品规格；请查阅产品数据表确认。
- 抑制剂：活性可被LEKTI结构域、α2-巨球蛋白及经典丝氨酸蛋白酶抑制剂（如PMSF和抑肽酶）所抑制。建议在检测中加入适当的抑制剂对照。
- 糖基化：KLK5是一种糖蛋白；不同表达系统（如哺乳动物与细菌系统）之间的糖基化状态可能不同，进而影响比活性和蛋白质折叠。
使用前请务必核实分析证书（CoA）中的活性和纯度数据，并在首次使用新批次产品时进行小规模活性验证实验。
操作、储存与复溶方案
妥善处理和储存重组人激肽释放酶5蛋白对于维持酶活性和防止降解至关重要。请遵循以下指南，并始终参阅产品专属数据表（rp368170）中的批次特定说明。
复溶
- 开瓶前短暂离心，使冻干物集中于瓶底。
- 用无菌超纯水或适当缓冲液（如50 mM Tris-HCl，pH 8.0，150 mM NaCl）复溶至分析证书（CoA）规定的建议浓度。
- 在室温下轻轻旋转静置5–10分钟；避免剧烈涡旋以防蛋白质变性。
- 如用于细胞实验，需进行过滤除菌。
储存
- 冻干蛋白应在–20 °C或–80 °C下储存，避免受潮和光照。
- 复溶后，分装为单次使用量，避免反复冻融，因为反复冻融会显著降低活性。
- 复溶后的蛋白长期保存应置于–80 °C，短期使用（最长1周）可存放于4 °C；储存稀释液时建议添加载体蛋白（如0.1% BSA）。
工作条件
- 在低蛋白结合管和吸头中操作，以减少低蛋白浓度下的吸附损失。
- 最佳检测条件（pH、温度、离子强度、辅因子）应通过实验验证；起始条件建议请参阅产品数据表。
研究应用
重组人激肽释放酶5蛋白是一种多功能研究试剂，适用于多个科学领域：
- 皮肤生物学与脱屑研究：KLK5用于研究正常皮肤脱落的蛋白水解过程，并模拟KLK/LEKTI轴失调相关的病理状态，如内瑟顿综合征、Comel-内瑟顿综合征变体和特应性皮炎。
- 蛋白酶底物谱分析：用于降解组学和蛋白质组学研究，以鉴定和表征KLK5在细胞外基质和细胞表面的底物，包括角蛋白桥粒蛋白、桥粒糖蛋白-1及其他结构蛋白。
- 酶动力学与抑制剂筛选：适用于测定动力学参数（Km、Vmax、kcat）以及对丝氨酸蛋白酶抑制剂进行高通量或中通量筛选，以寻找潜在治疗药物。
- 激肽释放酶级联研究：用于剖析KLK激活级联，特别是KLK5激活KLK7和KLK14的作用，以理解皮肤中的蛋白酶前馈放大机制。
- 癌症生物标志物研究：KLK5在某些卵巢癌、乳腺癌及其他上皮性肿瘤中表达升高；重组蛋白用于ELISA开发、抗体验证及功能研究。
- 结构与生物物理学研究：用于晶体学、氢-氘交换质谱（HDX-MS）及其他结构生物学方法，以表征酶的活性位点和抑制剂结合模式。
质量保证与订购信息
阿拉丁科学（Aladdin Scientific）的重组人激肽释放酶5蛋白（货号：rp368170）按照严格研究应用的要求进行生产和质量控制。
质量控制
- 每批产品均经过纯度（通常通过SDS-PAGE和/或HPLC）、鉴别（如Western blot或质谱）及生物活性（酶活性检测）测试。
- 每批货物均附有分析证书（CoA），包含所有质控参数的批次特定数据。
- 内毒素水平经过检测和控制；请查阅CoA获取批次特定数值，这对细胞实验尤为重要。
订购
- 货号：rp368170
- 产品名称：重组人激肽释放酶5蛋白
- 请联系阿拉丁科学客服或访问产品页面获取最新价格、可用规格及货期信息。
- 大批量及定制配方可应要求提供。
收货后的运输与储存
- 蛋白质通常以干冰运输；收货时请检查包装，确认产品保持冷冻或处于适当的物理状态。
- 除非计划立即使用，收货后请立即转移至–80 °C储存。
常见问题
重组人激肽释放酶5蛋白在研究中有哪些用途？
重组人激肽释放酶5蛋白主要用于研究表皮脱屑、皮肤屏障功能障碍及激肽释放酶蛋白酶级联。此外，它还应用于酶动力学检测、丝氨酸蛋白酶抑制剂筛选、癌症生物标志物研究以及通过蛋白质组学方法进行底物鉴定。
如何储存和处理重组人激肽释放酶5蛋白以保持其活性？
冻干蛋白应在–20 °C或–80 °C下避光防潮储存。复溶后，立即分装为单次使用量，长期储存置于–80 °C，短期使用（最长一周）可存放于4 °C。应避免反复冻融，使用低蛋白结合耗材，并在配制稀释液时添加载体蛋白（如0.1% BSA）。
复溶重组人激肽释放酶5蛋白推荐使用何种缓冲液？
无菌超纯水或温和的生理缓冲液（如含150 mM NaCl的50 mM Tris-HCl，pH 8.0）通常适用于复溶。请务必查阅产品rp368170随附的批次特定分析证书（CoA），以获取推荐的复溶缓冲液和复溶体积。
激肽释放酶5与哪些人类疾病相关？
是的。KLK5失调与内瑟顿综合征密切相关，该病是一种罕见遗传性皮肤病，由SPINK5基因功能缺失突变引起，导致KLK5蛋白水解活性失控及严重的皮肤屏障缺陷。KLK5还与特应性皮炎的发病机制有关，并被研究作为某些上皮性肿瘤（包括卵巢癌和乳腺癌）的生物标志物。
如何确认重组KLK5制剂具有酶活性？
可使用针对类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶的荧光底物或显色底物检测法（如含Arg-AMC或pNA偶联肽的底物）来确认酶活性。在加入或不加丝氨酸蛋白酶抑制剂（如PMSF或抑肽酶）的条件下随时间监测荧光或吸光度，以确认特异性活性。请参阅分析证书（CoA）获取阿拉丁科学提供的批次特定活性数值。
参考文献
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- Egelrud T, Brattsand M, Kreutzmann P, et al. hK5 and hK7, two serine proteinases abundant in human skin, are inhibited by LEKTI domain 6. Br J Dermatol. 2005;153(6):1200-1203.
- Borgoño CA, Diamandis EP. The emerging roles of human tissue kallikreins in cancer. Nat Rev Cancer. 2004;4(11):876-890. doi:10.1038/nrc1474
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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