重组人激肽原-1蛋白:研究使用指南
重组人激肽原-1蛋白:研究使用指南
Recombinant Human Kininogen-1 Protein是一种关键的多功能血浆糖蛋白,作为缓激肽及高分子量激肽的前体,在接触激活凝血通路、炎症信号传导及血压调节中发挥核心作用。
- 产品名称
- 重组人激肽原-1蛋白
- 货号
- rp368842
- 基因名称
- KNG1
- 蛋白来源
- 人源
- 主要生物学功能
- 缓激肽前体;参与接触激活凝血通路及炎症反应
- 主要相互作用蛋白
- 凝血因子XII(Hageman因子)、血浆激肽释放酶、凝血因子XI
生物学背景与功能
激肽原-1(KNG1),又称高分子量激肽原(HMWK)或Williams-Fitzgerald-Flaujeac因子,是由人类KNG1基因编码的多功能血浆糖蛋白。其主要由肝脏合成并分泌至血液循环中,作为激肽-激肽释放酶系统的关键组分发挥作用。
KNG1存在两种主要剪接异构体:高分子量激肽原(HMWK)和低分子量激肽原(LMWK)。HMWK是血浆中的主要存在形式,在内源性(接触激活)凝血通路中居于核心地位,作为非酶性辅因子,协助凝血因子XII(Hageman因子)、前激肽释放酶及凝血因子XI组装于带负电荷的表面。
经血浆激肽释放酶激活后,KNG1释放具有血管活性的九肽——缓激肽,后者通过其受体B1R和B2R介导血管舒张、血管通透性增加、痛觉信号传导及炎症反应。因此,KNG1是连接凝血与炎症的分子桥梁。此外,KNG1还通过其D2结构域抑制半胱氨酸蛋白酶,并具有抗血栓活性,以及参与血管生成和细胞黏附等功能。
复溶与储存方案
重组人激肽原-1蛋白(rp368842)的正确复溶与储存对于维持蛋白活性和实验重复性至关重要。请遵循以下指南以获得最佳结果。
复溶:开瓶前请短暂离心,使冻干物沉积于管底。将蛋白溶于无菌去离子水或适当的生理缓冲液(如PBS,pH 7.4),浓度参考产品说明书。轻柔吸打使蛋白溶解,避免剧烈涡旋振荡,以免造成变性或聚集。若产品为液态,使用前轻轻混匀即可。
工作分装:为减少冻融次数,复溶后应制备单次用量的分装,根据需要储存于−20°C或−80°C。已解冻的分装不得再次冷冻。
储存条件:冻干品应储存于−20°C,避光防潮。复溶后可在2–8°C短期储存(不超过1周);如需长期储存,请分装后置于−80°C冷冻保存。加入载体蛋白(如0.1% BSA)可增强储存稳定性。
注意:请参阅产品专属质检报告(CoA)及说明书(absea#PP-11972)以获取批次特定的复溶体积、浓度及稳定性数据。
实验应用
重组人激肽原-1蛋白(rp368842)适用于与凝血、激肽及炎症系统相关的多种体外研究应用,代表性应用包括:
- 凝血实验:KNG1可用于重建KNG1缺陷血浆,以研究HMWK在内源性凝血通路中的作用,包括活化部分凝血活酶时间(aPTT)测定及接触激活研究。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:重组KNG1适用于通过ELISA、表面等离子共振(SPR)及共免疫沉淀等技术研究其与凝血因子XII、前激肽释放酶、凝血因子XI及其他接触相蛋白之间的结合相互作用。
- 缓激肽释放实验:KNG1可作为血浆激肽释放酶活性测定的底物,在受控生化条件下测量缓激肽生成动力学。
- 细胞实验:该蛋白可用于研究受体介导的细胞信号传导(B1R/B2R)、细胞黏附及与炎症和血管生物学相关的内皮细胞反应。
- 酶抑制研究:可利用已建立的荧光或显色底物评估D2结构域的半胱氨酸蛋白酶抑制功能。
- Western Blot及ELISA标准品:重组KNG1可作为免疫检测中检测内源性激肽原的阳性对照或标准曲线组分。
请根据具体实验体系,对蛋白浓度、缓冲液条件及实验格式进行经验性优化。
质量、纯度与规格
爱丁科学的重组人激肽原-1蛋白(rp368842)采用重组表达系统生产,确保批次间一致性和重复性。该类重组蛋白通常需评估的关键质量属性包括:
- 纯度:通过SDS-PAGE和/或HPLC评估;高纯度制品可最大限度减少灵敏生化实验中的背景干扰。
- 生物活性:通过适合该蛋白的功能实验确认,如凝血重建实验或激肽释放酶介导的裂解实验。
- 内毒素水平:通过鲎试剂(LAL)法检测;低内毒素水平对于细胞实验和体内研究至关重要。
- 分子量确认:通过还原型和非还原型SDS-PAGE验证,与所表达KNG1异构体的预期分子量一致。
- 无菌性:用于细胞培养的制品需进行无菌检测或经0.2 μm膜过滤处理。
每批产品(absea#PP-11972)附有质检报告(CoA),请参阅其中的批次特定规格、纯度值及活性数据。如需定制规格或批量采购咨询,请联系爱丁科学技术支持团队。
常见问题
重组人激肽原-1蛋白在研究中有哪些用途?
重组人激肽原-1蛋白(rp368842)主要用于研究激肽-激肽释放酶系统、内源性凝血通路及炎症信号传导。应用范围包括凝血重建实验、与接触相因子的蛋白-蛋白相互作用研究、缓激肽释放实验,以及作为ELISA和Western blot的阳性对照。
重组人激肽原-1蛋白应如何复溶和储存?
开瓶前短暂离心,然后按说明书规定浓度用无菌水或PBS(pH 7.4)复溶。制备单次用量分装以避免反复冻融。冻干品储存于−20°C,复溶后分装物长期保存于−80°C。请参阅产品质检报告(absea#PP-11972)获取批次特定指导。
rp368842采用何种表达系统生产,这会影响糖基化吗?
rp368842的具体表达系统(如哺乳动物、昆虫或大肠杆菌)应以产品说明书或质检报告为准,因为这直接影响包括糖基化在内的翻译后修饰。天然人源KNG1为糖蛋白;需要与天然糖基化模式接近的研究人员应选择哺乳动物系统表达的制品。
重组人激肽原-1蛋白能否用于细胞实验?
是的,重组人激肽原-1蛋白可用于细胞实验,以研究缓激肽受体信号传导(B1R/B2R)、细胞黏附及内皮细胞反应。用于细胞实验时,必须使用低内毒素制品。在进行细胞培养实验前,请通过质检报告核实内毒素水平。
激肽原-1的HMWK和LMWK异构体有何区别?
高分子量激肽原(HMWK)和低分子量激肽原(LMWK)均由KNG1基因通过选择性剪接编码,但在C末端轻链结构域上存在差异。HMWK是血浆中的主要形式,作为接触激活凝血的辅因子;而LMWK主要参与组织激肽释放酶介导的激肽生成。请通过产品说明书确认rp368842所代表的异构体类型。
参考文献
- Colman RW, Schmaier AH. Contact system: a vascular biology modulator with anticoagulant, profibrinolytic, antiadhesive, and proinflammatory attributes. Blood. 1997;90(10):3819-3843. PMID:9354649
- Schmaier AH. The contact activation and kallikrein/kinin systems: pathophysiologic and physiologic activities. J Thromb Haemost. 2016;14(1):28-39. PMID:26565070
- Moreau ME, et al. The kallikrein-kinin system: current and future pharmacological targets. J Pharmacol Sci. 2005;99(1):6-38. PMID:16177542
- Aladdin Scientific. Recombinant Human Kininogen-1 Protein (rp368842) Product Datasheet. absea#PP-11972.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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