重组人LANCL1蛋白:操作与应用实验方案
重组人LANCL1蛋白:操作与应用实验方案
Recombinant Human LANCL1 Protein是一种研究级试剂,旨在支持对LanC样蛋白1生物学功能的研究,包括其在细胞信号传导、免疫调节和代谢过程中的作用。
- 产品名称
- 重组人LANCL1蛋白
- 货号
- rp369008
- 蛋白家族
- LanC样(LANCL)蛋白家族,与细菌LanC酶同源
- 物种来源
- 人(智人)
- 主要研究应用
- 信号转导研究、结合实验、Western blot、ELISA、免疫沉淀
- 储存建议
- 储存于-20°C或-80°C;避免反复冻融
LANCL1概述及研究意义
LANCL1(LanC样蛋白1)是LanC酶超家族的哺乳动物成员,最初通过与细菌羊毛硫肽合成酶C(LanC)的同源性被鉴定。在人类中,LANCL1广泛表达,在神经和免疫组织中表达水平尤为突出。该蛋白主要定位于质膜的胞质面和细胞质中。
新兴证据表明LANCL1是脱落酸(ABA)的受体和信号枢纽,ABA是一种植物激素,在哺乳动物系统中也具有免疫调节和代谢效应。LANCL1与相关家族成员LANCL2共同参与ABA依赖的cAMP/PKA和AMPK信号级联激活,影响炎症反应、胰岛素敏感性和免疫细胞功能。
Aladdin Scientific的重组人LANCL1蛋白(货号:rp369008)使研究人员能够研究蛋白-配体相互作用、筛选LANCL1活性调节剂,并建立与免疫学、代谢疾病和神经科学相关的体外检测体系。
复溶与储存方案
所需材料:无菌去离子水或产品说明书推荐的复溶缓冲液、微量离心管(建议使用低蛋白结合型)及经校准的移液器。
复溶步骤:
- 开瓶前,将冻干蛋白小瓶在室温下平衡10–15分钟,以减少冷凝水。
- 将密封小瓶短暂离心(1,000 × g,30秒),使冻干饼集中于瓶底。
- 将适量无菌复溶缓冲液(通常为无菌PBS,pH 7.4,或按检验合格证书规定)沿小瓶内壁缓慢加入,勿直接注射到蛋白饼上。
- 轻轻旋转小瓶使蛋白溶解,切勿涡旋,因为剧烈振荡可导致变性和聚集。
- 在室温下静置5分钟,确保完全溶解。溶液应呈澄清至略微乳白色。
储存条件:
- 短期(最多1周):储存于2–8°C。
- 长期:分装为单次用量,储存于-20°C或-80°C,以防止因反复冻融导致活性损失。
- 可向复溶液中加入载体蛋白(如0.1% BSA)以提高长期储存稳定性,除非这会干扰后续实验。
注意:请始终参阅每批次随附的检验合格证书(CoA),获取批次特定的复溶体积和储存说明。
实验应用与检测指导
重组人LANCL1蛋白适用于多种体外生化和细胞研究应用,推荐用途包括但不限于:
- 蛋白-配体结合实验:LANCL1可用作表面等离子体共振(SPR)、等温滴定量热法(ITC)或珠基结合实验中的捕获或检测蛋白,以表征其与ABA或其他潜在配体的相互作用。
- Western blot(WB):用作阳性对照抗原,以验证抗LANCL1抗体或校准细胞/组织裂解液实验的检测灵敏度。
- ELISA:将重组LANCL1包被于微孔板作为捕获抗原,用于夹心法或竞争法ELISA,定量检测实验样品中的LANCL1或其结合配体。
- 免疫沉淀(IP)和共免疫沉淀(Co-IP):用作标准品,在LANCL1互作蛋白研究中确认抗体特异性和下拉效率。
- 功能/酶活性实验:在明确的生化体系中研究LanC家族成员的潜在GTP酶或其他酶活性。
工作浓度指导:最佳浓度因实验格式而异,需由最终用户通过实验确定。作为一般起始点,此类重组蛋白在ELISA和WB应用中通常使用0.1–10 µg/mL。
标记:rp369008的具体验证工作浓度未在来源材料中提供,应向Aladdin Scientific技术支持咨询或查阅产品说明书确认。
质量控制与安全注意事项
质量控制:每批重组人LANCL1蛋白(rp369008)均按照规定的质量规格生产和检测。此类重组蛋白的典型质控检测包括:
- 通过SDS-PAGE和/或HPLC进行纯度评估(通常≥85%或≥95%,批次特定——请在CoA上确认)
- 通过质谱法或N端测序确认蛋白身份
- 通过LAL(鲎变形细胞裂解液)法进行内毒素检测
- 在适用情况下进行生物活性检测
请务必索取并审阅所收到批次的检验合格证书(CoA)。妥善保存CoA记录,以确保实验重复性和法规合规性。
安全性:重组人LANCL1蛋白仅供科学研究使用(RUO),未经批准用于诊断、治疗或兽医用途。请按照所在机构的生物安全指南将其作为潜在生物危害品处理。使用适当的个人防护装备(PPE),包括手套和护目镜。有关处置和急救信息,请查阅Aladdin Scientific提供的安全数据表(SDS)。
标记:rp369008的具体纯度值和内毒素限值未在来源材料中说明,请从产品CoA或Aladdin Scientific技术支持处获取确认数值。
常见问题排查
以下指导涉及使用LANCL1等重组蛋白时常见的问题:
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 复溶后蛋白聚集 | 复溶过程中涡旋;在不正确的温度下复溶 | 通过旋转轻柔复溶;在室温下复溶;加入0.1% BSA作为载体;使用前低速离心去除聚集体 |
| ELISA或WB信号弱 | 蛋白浓度不适;储存不当导致降解 | 滴定蛋白浓度;核实储存条件;查看CoA活性数据;使用新鲜分装品 |
| SDS-PAGE上出现多条带 | 部分降解;糖基化或翻译后修饰 | 查看批次CoA上的预期条带模式;储存于-80°C;避免反复冻融;样品制备时使用蛋白酶抑制剂 |
| 实验间结果不一致 | 冻融降解;黏性溶液移液变异性 | 将蛋白预先分装为单次用量;使用前将分装品平衡至工作温度;使用经校准的移液器 |
如果上述步骤无法解决问题,请联系Aladdin Scientific技术支持,并提供批次号和CoA详情。
常见问题
LANCL1是什么?它与生物医学研究有何关联?
LANCL1(LanC样蛋白1)是一种保守的哺乳动物蛋白,与细菌羊毛硫肽合成酶同源。它已被鉴定为脱落酸(ABA)的哺乳动物受体,参与cAMP/PKA和AMPK信号传导,因此与免疫学、2型糖尿病等代谢疾病及神经系统疾病的研究密切相关。
如何复溶重组人LANCL1蛋白(rp369008)?
将冻干小瓶平衡至室温,然后短暂离心,再沿瓶壁轻轻加入推荐体积的无菌复溶缓冲液(通常为无菌PBS,pH 7.4)。轻轻旋转溶解——切勿涡旋——并静置5分钟确保完全溶解。请务必参阅检验合格证书(CoA)获取批次特定的操作说明。
重组人LANCL1蛋白经验证可用于哪些检测应用?
重组人LANCL1蛋白适用于蛋白-配体结合实验(如SPR、ITC)、作为阳性对照抗原的Western blot、作为捕获或标准抗原的ELISA,以及免疫沉淀实验。各特定检测格式的最佳浓度应通过实验确定。
如何储存重组人LANCL1蛋白以维持其活性?
短期使用(最多一周),储存于2–8°C。长期储存时,将复溶蛋白分装为单次用量,储存于-20°C或-80°C。避免反复冻融,这会破坏蛋白完整性。添加载体蛋白(如0.1% BSA)有助于储存期间稳定蛋白,除非这会干扰您的实验。
重组人LANCL1蛋白是否适用于临床或诊断用途?
不适用。重组人LANCL1蛋白(rp369008)被指定仅供科学研究使用(RUO),未经验证或批准用于临床、诊断、治疗或兽医用途。应按照所在机构的生物安全指南进行操作。
参考文献
- Sturla L, Fresia C, Guida L, et al. LANCL2 is necessary for abscisic acid binding and signaling in human granulocytes and in rat insulinoma cells. J Biol Chem. 2009;284(41):28045-28057. doi:10.1074/jbc.M109.035329
- Leber A, Hontecillas R, Zoccoli-Rodriguez V, Bassaganya-Riera J. Activation of LANCL2 by BT-11 ameliorates IBD by supporting regulatory T cell stability through stabilization of PPAR-γ and inhibition of AhR expression. Inflamm Bowel Dis. 2019;25(5):919-932. doi:10.1093/ibd/izy400
- Fresia C, Vigliarolo T, Guida L, et al. G-protein coupling and nuclear translocation of the human abscisic acid receptor LANCL2. Sci Rep. 2016;6:26658. doi:10.1038/srep26658
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