重组人MAP3K11蛋白:研究指南与应用
重组人MAP3K11蛋白:研究指南与应用
Recombinant Human MAP3K11 Protein是一种关键的研究级激酶试剂,使研究人员能够在体外研究MLK3介导的JNK/SAPK信号传导、凋亡级联反应及细胞应激响应。
- 蛋白名称
- 重组人MAP3K11(MLK3)
- 货号
- rp369457
- 蛋白家族
- 混合谱系激酶家族(MLK),MAP3K亚家族
- 主要功能
- 丝氨酸/苏氨酸激酶;激活JNK/SAPK和p38 MAPK信号通路
- 主要研究应用
- 激酶活性检测、细胞凋亡研究、应激响应通路分析、药物靶点验证
- 储存建议
- 分装后于-80°C储存;避免反复冻融
- 形式
- 重组蛋白(具体标签、纯度及缓冲液详情请参阅产品说明书)
MAP3K11(MLK3)的生物学背景
MAP3K11,又称混合谱系激酶3(MLK3),是混合谱系激酶(MLK)家族成员,属于更广泛的MAP3K(丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶)超家族。它作为丝氨酸/苏氨酸激酶,在应激激活的信号级联中发挥核心调控作用。
MAP3K11在多种人体组织中广泛表达,在神经元、免疫细胞和上皮细胞中尤为深入研究。在细胞因子、生长因子撤除、氧化应激和紫外线照射等上游信号激活后,MAP3K11磷酸化并激活下游MAP2K(如MKK4和MKK7),进而激活c-Jun氨基端激酶(JNK)和p38 MAPK。这些通路调控细胞凋亡、炎症、分化和细胞骨架重组等关键细胞决策。
在结构上,MAP3K11含有N端SH3结构域、催化激酶结构域、亮氨酸拉链基序和CRIB(Cdc42/Rac互作结合)结构域,后者使其能够接受Cdc42和Rac1等Rho家族GTPase的上游调控。这种多结构域架构使MAP3K11成为整合多种胞外和胞内应激信号的多功能节点蛋白。
重组人MAP3K11蛋白的研究应用
重组人MAP3K11蛋白(rp369457)是研究MAP激酶信号传导、细胞死亡机制及神经退行性疾病的多功能工具。主要研究应用包括:
- 体外激酶活性检测:MAP3K11可直接用于生化激酶检测,评估对下游底物(如MKK4、MKK7或通用激酶底物)的磷酸化,从而支持激酶抑制剂候选物筛选及构效关系(SAR)研究。
- 细胞凋亡通路分析:MAP3K11激活JNK通路——应激诱导凋亡的核心介质——重组MAP3K11可用于重建信号系统,解析癌症、神经退行性疾病及缺血模型中的促凋亡机制。
- 药物发现与抑制剂筛选:MAP3K11已被确认为肿瘤学和神经系统疾病的潜在治疗靶点。重组蛋白用于高通量及二次筛选,以验证抑制剂的选择性和效力。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:MAP3K11的SH3和CRIB结构域介导与上游调控蛋白及支架蛋白的相互作用。重组MAP3K11可用于pull-down检测、共免疫沉淀对照及表面等离子共振(SPR)实验。
- 抗体验证:作为纯化抗原,重组MAP3K11可用作Western印迹、ELISA开发及免疫检测标准化的阳性对照。
操作、储存与复溶规程
正确操作重组人MAP3K11蛋白对于保持酶活性和实验重复性至关重要。请遵循以下指南:
- 收到产品时:立即检查产品状态。若为冻干品,开瓶前短暂离心以汇集粉末;若为液态,立即置于冰上。
- 复溶(冻干产品):按产品说明书规定的体积,用无菌超纯水或指定缓冲液复溶,使其达到推荐工作浓度。轻柔吹打混匀,切勿涡旋,以免蛋白变性。
- 分装:复溶后立即制备单次用量分装,最大限度减少反复冻融导致的降解。使用低吸附微离心管以减少蛋白损失。
- 储存:长期储存分装品于-80°C。如有必要,短期储存(不超过1周)可置于-20°C。避免在4°C长时间储存。
- 工作条件:实验操作过程中保持蛋白置于冰上。进行激酶检测时,请参阅说明书中推荐的缓冲液组成、pH值、二价阳离子需求(通常为Mg²⁺或Mn²⁺)及ATP浓度。
- 载体蛋白:若蛋白不含BSA或甘油稳定剂且使用浓度极低,可考虑添加载体蛋白(如0.1% BSA)以防止非特异性吸附。
注意:请务必查阅具体产品说明书(rp369457)获取准确的复溶体积、储存缓冲液及稳定性数据,因各批次配方可能有所不同。
质量、纯度与法规注意事项
Aladdin Scientific提供的重组人MAP3K11蛋白(rp369457)仅供研究使用(RUO),未获批准用于人体或动物的诊断或治疗程序。
纯度与质量控制:该产品类别的重组蛋白通常通过SDS-PAGE和/或Western印迹验证分子量和特异性,并在适用时进行活性检测。具体纯度等级和质控数据请参阅产品说明书及分析证书(CoA)。研究人员应在启动关键实验前索取所收到批次的CoA,确认产品符合规格要求。
内毒素水平:对于细胞实验,内毒素污染可能干扰实验结果。请通过CoA核实内毒素水平,确认其符合所用检测体系的要求。如需更低内毒素水平,请联系Aladdin Scientific客户服务团队。
生物安全:本产品来源于重组表达系统(具体宿主详见说明书,如大肠杆菌、昆虫细胞或哺乳动物细胞)。请按照所在机构针对重组蛋白的生物安全规程操作,使用前请查阅安全数据表(SDS)。
批次间一致性:与所有生物试剂一样,批次间可能存在微小差异。在进行中研究中启用新批次时,建议与前一批次进行平行比较,以确保结果一致性。
常见问题
MAP3K11(MLK3)是什么?为什么它是重要的研究靶点?
MAP3K11,又称MLK3,是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,可在细胞应激、细胞因子及生长因子撤除的刺激下激活JNK和p38 MAPK通路。它调控细胞凋亡、炎症和神经元存活,因此是肿瘤学、神经退行性疾病和代谢疾病研究的重要靶点。
如何储存和操作重组人MAP3K11蛋白(rp369457)以维持其活性?
收到产品后,将蛋白分装为单次用量,长期储存于-80°C。避免反复冻融,因为这会降低酶活性。实验操作过程中保持蛋白置于冰上。请务必参阅产品说明书了解具体的缓冲液和复溶操作说明。
重组人MAP3K11蛋白可用于抑制剂筛选检测吗?
可以,重组MAP3K11非常适合用于体外激酶抑制剂筛选。它可与适当底物和ATP结合,用于生化激酶检测以测量小分子的抑制活性。在启动高通量筛选前,请参阅产品说明书确认最佳检测条件,包括蛋白浓度、底物、缓冲液和ATP浓度。
重组人MAP3K11蛋白(rp369457)适合用于细胞实验吗?
重组MAP3K11主要用于体外生化检测。若用于细胞实验,请确认分析证书上标注的内毒素水平符合您所用细胞类型和检测体系的要求,因为内毒素污染可激活先天免疫通路并干扰实验结果。如需特定批次的内毒素数据,请联系Aladdin Scientific。
MAP3K11在体外可磷酸化哪些下游底物?
MAP3K11主要磷酸化并激活MAP2K成员MKK4和MKK7,它们是JNK家族激酶的直接上游激活因子。MAP3K11还可激活MKK3和MKK6,后者介导p38 MAPK通路。体外激酶检测通常使用重组失活的MKK4或MKK7作为底物,或根据检测设计选用髓鞘碱性蛋白(MBP)等通用底物。
参考文献
- Gallo KA, Johnson GL. Mixed-lineage kinase control of JNK and p38 MAPK pathways. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002;3(9):663-672. doi:10.1038/nrm906
- Bhatt DL, Bhattacharyya S. MLK3 in cell signaling and disease. Trends Cell Biol. (General textbook-level reference; specific citation details require verification.)
- Aladdin Scientific. Recombinant Human MAP3K11 Protein, SKU rp369457. Product Datasheet.
- Kyriakis JM, Avruch J. Mammalian MAPK signal transduction pathways activated by stress and inflammation. Physiol Rev. 2012;92(2):689-737. doi:10.1152/physrev.00028.2011
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